[發明專利]3D數字PCR檢測EGFR特定基因突變的引物探針組合物、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201710888203.2
• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN107488728B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 閆慧婷;蔡暢;王海波
• 申請（專利權）人: 無錫臻和生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 韓建偉;金田蘊

1.一種3D數字PCR檢測EGFR特定基因突變的裝置，其特征在于，所述裝置用于執行以下方法包括：

利用試劑盒配制每個突變位點的PCR反應體系；

將各所述突變位點的PCR反應體系加樣至數字PCR芯片中；

將所述數字PCR芯片放入數字PCR儀中進行PCR擴增，得到擴增結果；

將得到所述擴增結果的所述數字PCR芯片放到芯片掃描儀中進行熒光信號掃描，根據所述熒光信號判讀所述EGFR特定基因的突變結果；

所述試劑盒包括3D數字PCR檢測EGFR特定基因突變的引物探針組合物，所述引物探針組合物包括：檢測EGFR基因19～21號外顯子特定突變的引物及探針，所述突變為EGFRT790M、EGFR L858R、EGFR 2235_2249del15和EGFR 2236_2250del15；所述檢測EGFR基因19～21號外顯子突變的引物及探針如下表1所示：

表1：

；

每個突變位點的PCR反應體系中，野生探針攜帶VIC信號，突變探針攜帶FAM信號，所述熒光信號掃描的結果中，擴增結果的二維圖分為FAM(+)VIC(-)區、FAM(+)VIC(+)區、FAM(-)VIC(-)區以及FAM(-)VIC(+)區四個象限，將陽性對照在FAM(+)VIC(-)區的成簇突變點的FAM最小熒光值記為P，根據所述熒光信號判讀所述EGFR特定基因的突變結果的步驟包括：

若待測樣本位于FAM(+)VIC(-)區，且所述待測樣本的FAM熒光值≥P的突變點的數目≥3，則判定所述待測樣本為陽性樣本；

若待測樣本位于FAM(+)VIC(-)區，且所述待測樣本的FAM熒光值≥P的突變點的數目3，則判定所述待測樣本為陰性樣本或低于檢測限。

2.根據權利要求1所述的裝置，其特征在于，所述試劑盒中擴增每個突變位點的引物及探針以引物探針混合液的形式存在。

3.根據權利要求1所述的裝置，其特征在于，所述試劑盒還包括陰性質控品和陽性質控品；所述陽性質控品為含有所述EGFR基因突變的DNA與野生型DNA的混合液。

4.根據權利要求1所述的裝置，其特征在于，所述試劑盒還包括QuantStudio 3D數字PCR預混液，所述預混液包括dNTPs、Taq酶及PCR緩沖液。