[發明專利]基于DNA條形碼的海水蟹類物種鑒別方法

在審

• 申請號: 201710879103.3
• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN108330169A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 胡則輝;柴學軍;王躍斌;胡成碩
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 嘉興永航專利代理事務所(普通合伙) 33265
• 代理人: 侯蘭玉

本發明涉及一種物種鑒別方法，特別涉及一種基于DNA條形碼的海水蟹類物種鑒別方法。一種 DNA 條形碼引物，所述 DNA 條形碼引物的核苷酸序列為 SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。本發明提供的是一種6種不同蟹類的DNA條形碼引物，DNA條形碼目的片段的PCR產物堿基數為217 bp。本發明通過供試的六種蟹類的DNA條形碼目的片段的PCR產物堿基序列進行比對分析，確定6種蟹類各自特異性的DNA條形碼堿基序列，建立蟹類物種的分子生物學鑒別方法。

技術領域

本發明涉及一種物種鑒別方法，特別涉及一種基于DNA條形碼的海水蟹類物種鑒別方法，更具體涉及一種基于DNA條形碼的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)、紅星梭子蟹(P.sanguinolentus)、綿蟹(Dromia dehaani)、日本蟳(Charybdis japonica)、銳齒蟳(C.acuta)和銹斑蟳(C.feriatus)等蟹類的物種鑒別方法。

背景技術

DNA條形碼(DNA barcoding)是一段標準的，能快速、高效鑒定物種的DNA序列。這個概念的產生是受零售業中條形碼技術應用的啟發。DNA條形碼技術就像在零售業中廣泛運用的商品條形碼一樣，通過對一個生物實體的一個或多個基因進行掃描，來鑒定物種和發現新種，以期建立起DNA序列和生物物種之間一一對應的關系。隨著分子生物技術和計算機技術的發展，DNA條形碼——這種新興的技術已得到許多領域的越來越多的科學家的關注，利用DNA條形碼發現新物種或隱存種，鑒定瀕危物種和鑒別外來入侵種的工作方興未艾，并為保護生物多樣性做出了巨大的貢獻。

根據董聿茂(1991,1998)報道，浙江海域(包括潮間帶)分布的經濟蟹類有156種，在上述種類中，群體數量較大、經濟價值較高的有三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)、紅星梭子蟹(P.sanguinolentus)、銹斑蟳(Charybdis feriatus)、細點圓趾蟹(Ovalipes punctatus)、日本蟳(C.japonica)、武士蟳(C.miles)、光掌蟳(C.riversandersoni)、雙斑蟳(C.bimaculata)以及分布在河口、港灣的擬穴青蟹(Scyllaserrata)、中華絨螯蟹(Eriochier sinensis)。由于蟹類肉質鮮美、營養豐富、利用價值高，深受國內外消費者喜愛。隨著人們對大型經濟蟹類的需求量日益增加，三疣梭子蟹、日本蟳等已成為我省海水養殖業的主導品種和重要的出口創匯產品。

宋海棠等(2006)認為在浙江沿海的蟹類資源相對豐富，具備較高的物種多樣性。正確認識和區分物種，特別是對那些具有保護意義的種類，分類鑒定工作就顯得尤其重要。一般而言，依靠傳統經驗為主的海洋生物形態鑒定方法具有較大局限性，比如受物種性別和發育階段的限制；許多復合單元即隱存種難以準確鑒定；表型可塑性和遺傳多樣性容易導致不正確的鑒定等。當傳統的分類學受到阻礙時，DNA條形碼技術就可以發揮其優勢：①利用生物體零散組織鑒別物種；②針對生物體各個生長發育階段鑒別物種；③準確區分形態相似的不同物種；④鑒定工作更加精準和鑒定周期更加縮短；⑤鑒定范圍沒有限制。DNA條形碼已經成為生態學研究的重要工具，不僅用于物種鑒定，同時也幫助生物學家進一步了解生態系統內發生的相互作用。但是目前國內外尚無利用DNA微型碼鑒定蟹類物種的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于DNA條形碼的海水蟹類物種鑒別方法，該方法具有耗時短，操作簡便，特異性強的優點。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種DNA條形碼引物，所述DNA條形碼引物的核苷酸序列為：

CS 217-F:GGACGATAAGACCCTATAAA(SEQ ID NO：1)；

CF 217-R:ATTACGCTGTTATCCCTAAA(SEQ ID NO：2)。本發明提供的是一種6種不同蟹類的DNA條形碼引物，DNA條形碼目的片段的PCR產物堿基數為217bp。