[發明專利]一種用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置及其培養方法

有效

• 申請號: 201710878239.2
• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN107475110B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 王曉冰
• 申請（專利權）人: 上海萊威生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/40
• 分類號: C12M1/40;C12M1/02;C12M1/00;C12N5/0775
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本發明公開了一種人羊膜間充質干細胞的預處理裝置及其培養方法，該預處理裝置包括：上蓋；與上蓋鉸鏈連接的殼體；位于殼體開口處的切割組件，切割組件與上蓋相配合設置；位于殼體中部的消化組件；以及位于殼體下部的清洗離心組件，該清洗離心組件包括U型倉體、攪拌槳和微電機。還提供一種基于該預處理裝置的細胞預處理以及培養方法，其由人羊膜切碎分離、酶消化、離心純化、培養基配制、二維培養、傳代培養等六步過程組成?；诒景l明預處理裝置的細胞培養方法，技術穩定，重復性好，避免了細胞活性低、得率差的問題，極大地提高細胞活性和得率，且簡化了操作過程，使用靈活方便。

技術領域

本發明涉及人的細胞培養技術領域，具體涉及一種用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置及其培養方法。

背景技術

多能間充質細胞又名間充質干細胞，是一類很有特性的成體干細胞。這些細胞具有分化為各種成熟細胞的潛能，包括：脂肪細胞、軟骨細胞、骨細胞、肌腱細胞和肌細胞等。這些特性以及它們的發育可塑性引起了科研界的廣泛關注，因為其可被用于再生醫學領域，去替換變性壞死的組織。在應用了轉化生長因子的無血清培養條件下，間充質干細胞可以分化成軟骨細胞，而在應用了抗壞血酸和地塞米松的有血清培養條件下，這些細胞又可以分化成骨細胞。間充質干細胞具有增殖和分化成各種各樣間充質組織的特性。來源于羊膜和絨毛膜的間充質干細胞表達CD271，類似于心肌細胞，分泌多種抗血管增生和抗炎癥反應的蛋白。

目前，國內外已經有大量的研究人員進行了人羊膜間充質干細胞的培養和藥理學特性方面的研究，既往的研究多采用胰酶消化法或胰酶+膠原酶的形式。其缺點在于胰酶消化法對細胞的損害比較大，尤其是在37度水浴的條件下，胰酶可以最大程度地發揮其消化效力，故對消化時間和消化次數的掌控較難。過度消化會導致細胞損傷，細胞膜破損，DNA溢出。所以，以往的研究人員會發現，消化之后的單細胞懸液非常粘稠，有時需要在消化液中加入DNA酶來打斷溢出的DNA。這樣導致的結果往往是，細胞數量非常少、得率低且活力差。近年來，尤其是近兩年以來，將羊膜間充質干細胞作為生物藥品管理的趨勢越來越明顯，但由于缺乏規范且有效的分離方案，使得生產羊膜干細胞的效率無法量產達到臨床應用的需求。

此外，傳統人羊膜間充質干細胞的培養，一般先對人羊膜組織進行前處理獲得較為純凈的人羊膜間充質干細胞后，再采用培養皿進行培養。而對人羊膜組織進行前處理時，人羊膜組織需要在不同的處理設備或容器中進行預處理，人羊膜組織在這種空間大轉移過沖中很容易受到空氣中的細菌病毒等微生物的污染，因此，目前人羊膜帶間充質干細胞培養在這種開放式的前處理方式下手續繁瑣、效率低下，人力物力消耗較大，成才較高，無法大規模的推廣應用。

發明內容

本發明的目的在于，針對現有技術存在的缺陷，提供一種區別于傳統培養法的一種用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置及其培養方法，該培養方法使之簡單易行，培養獲得的人羊膜間充質干細胞較純，生長良好，細胞增殖快，可多次傳代，且細胞得率和存活率均大大提高。一個新生兒的羊膜樣本大約可以分離擴增出50~100億個干細胞，為羊膜干細胞成為生物藥品進行大量庫存提供了可能。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明的第一個方面是提供一種用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置，具體包括：

上蓋，所述上蓋上開設有網格狀刀槽；

與所述上蓋鉸鏈連接的殼體；

位于所述殼體開口處的切割組件，所述切割組件與所述上蓋相配合設置，以將洗滌后的人羊膜剪切為大小一致的組織小塊；

位于所述殼體中部的消化組件，由所述消化組件接收剪切后的人羊膜組織小塊并進行酶消化處理；以及位于所述殼體下部的清洗離心組件，所述清洗離心組件包括U型倉體和位于所述U型倉體內的攪拌槳，所述攪拌槳穿過所述U型倉體底部連接微電機，用于接收經酶消化處理后的細胞液并對所述細胞液進行清洗、純化處理。