[發明專利]一種用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置及其培養方法

有效

• 申請號: 201710878239.2
• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN107475110B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 王曉冰
• 申請（專利權）人: 上海萊威生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/40
• 分類號: C12M1/40;C12M1/02;C12M1/00;C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置，其特征在于，包括：

上蓋（100），所述上蓋（100）上開設有網格狀刀槽（101）；

與所述上蓋（100）鉸鏈連接的殼體（200）；

位于所述殼體（200）開口處的切割組件（300），所述切割組件（300）與所述上蓋（100）相配合設置，以將洗滌后的臍帶段剪切為大小一致的組織小塊；

位于所述殼體（200）中部的消化組件（400），由所述消化組件（400）接收剪切后的臍帶組織小塊并進行酶消化處理；

以及位于所述殼體（200）下部的清洗離心組件（500），所述清洗離心組件（500）包括U型倉體（501）和位于所述U型倉體（501）內的攪拌槳（506），所述攪拌槳（506）穿過所述U型倉體（501）底部連接微電機（507），用于接收經酶消化處理后的細胞液并對所述細胞液進行清洗、純化處理。

2.根據權利要求1所述的用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置，其特征在于，所述切割組件（300）由網格狀刀片（301）和彈性密封圈（302）組成，所述網格狀刀片（301）裝設于所述殼體（200）開口處的卡槽（201）內，且所述彈性密封圈（302）套設于所述網格狀刀片（301）的外周并與所述殼體（200）的上端面接觸連接。

3.根據權利要求2所述的用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置，其特征在于，所述彈性密封圈（302）的水平高度大于所述網格狀刀片（301）的水平高度；所述網格狀刀片（301）的水平高度大于所述卡槽（201）的水平高度。

4.根據權利要求3所述的用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置，其特征在于，所述網格狀刀片（301）與所述刀槽（101）的形狀大小一致，且所述刀槽（101）的深度為3.0-8.0mm。

5.根據權利要求1所述的用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置，其特征在于，所述消化組件（400）包括：一具有篩網（403）的消化倉體（401），和一活動安裝在所述消化倉（401）底部并與所述篩網（403）相對應的擋板（402），所述擋板（402）可前后移動與所述篩網（403）重疊或錯位設置，使得所述篩網（403）底部封閉或連通。

6.根據權利要求5所述的用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置，其特征在于，所述消化倉（401）為抽屜式可拆卸安裝在所述殼體（200）側壁上。

7.根據權利要求1所述的用于培養人羊膜間充質干細胞的預處理裝置，其特征在于，所述攪拌槳（506）上與所述U型倉體（501）底部接觸的部位套設有密封軸套（508）；所述U型倉體（501）側壁上設有進液口（502）和排液口（504），所述進液口（502）的水平高度大于所述排液口（504）的水平高度。

8.一種基于權利要求1-7任一項所述預處理裝置的人羊膜間充質干細胞的預處理方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1）人羊膜組織的獲取

將人羊膜用冰的生理鹽水充分洗滌干凈后，將人羊膜反復折疊成3-5層厚的5cm×5cm的組織塊，將該組織塊放入切割組件（300）上，按下上蓋（100）將組織塊剪切為大小一致的臍帶組織碎塊，落入消化倉體（401）內；

步驟2）酶消化處理

向裝有人羊膜組織碎塊的消化倉體（401）內加入初始濃度均為1mg/ml的復合酶；將預處理裝置整體放入4℃冰箱內過夜；第2天，將預處理裝置從預處從冰箱中取出，對組織液稍微吹打幾次，將消化組件（400）從預處理裝置中抽出，整體放入37℃水浴15分鐘，再次輕微吹打不超過5次，然后再推入預處理裝置中，前后推動擋板（402）打通篩網（403），使組織液經篩網（403）過濾后進入U型倉體（501）內；

步驟3）離心純化處理

向U型倉體（501）內加入PBS緩沖液400g，低速攪拌2分鐘后，將預處理裝置整體放入離心機離心5分鐘，去除上清液，沉淀重懸，加入PBS緩沖液洗2遍，即得較純的人羊膜間充質干細胞，然后用0.2%臺盼蘭計數活細胞數。

9.根據權利要求8所述的人羊膜間充質干細胞的預處理方法，其特征在于，所述步驟2）中復合酶由I型膠原酶、II型膠原酶、IV型膠原酶和Dispase酶按重量比1:1:1:1配制而成，且4種酶的初始濃度均為1mg/ml。