[發(fā)明專利]一種香菇發(fā)酵用補(bǔ)料培養(yǎng)基及香菇液體深層連續(xù)培養(yǎng)方法

在審

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• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN107418902A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭強(qiáng);申洋;桑艷麗;翟玥晗;夏俊紅
• 申請（專利權(quán)）人: 山東魯抗舍里樂藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所11569
• 代理人: 劉奇

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食用真菌液體深層發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵生產(chǎn)香菇的補(bǔ)料培養(yǎng)基和應(yīng)用該補(bǔ)料培養(yǎng)基進(jìn)行香菇液體深層連續(xù)培養(yǎng)的方法。

背景技術(shù)

香菇多糖(Lentinan)(分子式：(C₆H₁₀O₅)_n)是從優(yōu)質(zhì)香菇子實(shí)體中提取的有效活性成分，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗感染、抗病毒、抗氧化、延緩衰老、保護(hù)肝臟等作用，主要應(yīng)用于醫(yī)藥和保健品領(lǐng)域。香菇多糖能增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫功能，可對抗流感病毒，是一種有待開發(fā)的抗流感保健食品。

香菇多糖的生產(chǎn)包括從天然或人工培養(yǎng)的香菇子實(shí)體中提取和從發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體和發(fā)酵液中提取兩種方式。采用液體發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)菌絲體具有周期短、成本低、產(chǎn)量大，且有工業(yè)化生產(chǎn)前景等優(yōu)勢，是香菇多糖的主要生產(chǎn)方法。

目前現(xiàn)有的香菇液體發(fā)酵都是采用分批發(fā)酵的形式。分批發(fā)酵又稱為分批培養(yǎng)，是指在一個(gè)密閉系統(tǒng)內(nèi)投入有限數(shù)量的營養(yǎng)物質(zhì)后，接入少量的微生物菌種進(jìn)行培養(yǎng)，使微生物生長繁殖，在特定的條件下只完成一個(gè)生長周期的微生物培養(yǎng)方法。分批發(fā)酵的優(yōu)點(diǎn)在于：對發(fā)酵條件要求寬泛，不用特意區(qū)分菌種類型，對不同菌種類型均可采用類似的方式進(jìn)行發(fā)酵。

分批發(fā)酵雖然能夠有效獲得香菇菌絲體，進(jìn)而提取香菇多糖。但香菇作為食用真菌，其與單細(xì)胞細(xì)菌相比，具有培養(yǎng)過程中延遲期長，指數(shù)生長期增長緩慢呈算術(shù)級增長的特點(diǎn)。因此，香菇液體分批發(fā)酵容易呈現(xiàn)出粘度大，貼壁生長，不耐受剪切等技術(shù)問題，從而導(dǎo)致香菇液體分批發(fā)酵生產(chǎn)效率低下。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種香菇發(fā)酵用補(bǔ)料培養(yǎng)基及香菇液體深層連續(xù)培養(yǎng)方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供了一種香菇發(fā)酵用補(bǔ)料培養(yǎng)基，其特征在于，按重量百分比計(jì)，包括4-6％的葡萄糖、0.5-1％的多聚蛋白胨、0.5-1％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氫鉀、0.05-0.15％的硫酸鎂、0.05-0.15％的氯化鈣、0.3-0.5％的豆油、0.01-0.03％的吐溫80、0.05-0.15％的醋酸和91-93％水。

優(yōu)選的，所述的補(bǔ)料培養(yǎng)基按重量百分比計(jì)，還包括0.5-1.5％的木質(zhì)素。

本發(fā)明還提供了一種香菇液體深層連續(xù)培養(yǎng)方法，包括如下步驟：

在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中接種香菇種子液，在22-28℃條件下恒溫發(fā)酵培養(yǎng)，所述發(fā)酵的過程中控制發(fā)酵液的溶氧不低于25％，pH值為3.5～4.0；

發(fā)酵8-12天后，以稀釋率為0.01-0.04/h的補(bǔ)料速率向發(fā)酵液中加入權(quán)利要求1或2所述的補(bǔ)料培養(yǎng)基，繼續(xù)連續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)。

優(yōu)選的，所述香菇種子液的制備方法包括如下步驟：

(1)以孢子液接種法在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中接種香菇孢子，活化培養(yǎng)8-12天后，得活化菌種；

(2)以火焰接種的方法在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中接種所述活化菌種，擴(kuò)繁培養(yǎng)4-6天后，得香菇種子液。

優(yōu)選的，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基按重量百分比計(jì)，獨(dú)立包括4-6％的葡萄糖、0.2-0.3％的多聚蛋白胨、0.2-0.3％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氫鉀、0.05-0.15％的硫酸鎂、0.05-0.15％的氯化鈣和93-95％水。

優(yōu)選的，發(fā)酵過程中向發(fā)酵液中通入無菌空氣，所述無菌空氣的通氣比為0.4-0.6vvm。

優(yōu)選的，發(fā)酵過程中對發(fā)酵液進(jìn)行攪拌，攪拌的初始速度為120-180rpm。

優(yōu)選的，所述發(fā)酵過程中發(fā)酵液的pH用質(zhì)量體積濃度為15～25％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)。

優(yōu)選的，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基和/或補(bǔ)料培養(yǎng)基經(jīng)過滅菌處理；所述滅菌的條件獨(dú)立為：溫度120-122℃、壓力103-115kpa；所述滅菌的時(shí)間獨(dú)立為40-60min。

優(yōu)選的，所述香菇種子液的接種量為0.5-2％。

有益效果：

本發(fā)明提供了一種香菇發(fā)酵用補(bǔ)料培養(yǎng)基，該補(bǔ)料培養(yǎng)基營養(yǎng)全面均衡，可有效延長香菇指數(shù)生長期，提高香菇液體深層培養(yǎng)效率及生物量，提高香菇多糖產(chǎn)率。將所述補(bǔ)料培養(yǎng)基進(jìn)行香菇的液體深層連續(xù)發(fā)酵，可有效縮短香菇發(fā)酵的延遲期，延長香菇指數(shù)生長期至20天，提高香菇液體深層培養(yǎng)生物量72g/L，提高香菇多糖產(chǎn)量至10.8g/L。