[發(fā)明專利]一種基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710877782.0
• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN107677716B
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉青;顏芹;劉會;董云會
• 申請（專利權(quán)）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/36;G01N27/30;G01N33/569;G01N33/576;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于免疫分析和生物傳感技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種基于AuPdCu/N?GQDs@PS的免疫傳感器的制備方法及應用。采用基于AuPdCu/N?GQDs@PS構(gòu)建電化學免疫傳感器，實現(xiàn)了對乙型病毒性肝炎標志物的檢測，具有特異性強，靈敏度高，檢測限低等優(yōu)點，對乙肝疾病的檢測具有重要的科學意義和應用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫傳感器的制備方法及應用，屬于新型功能納米材料、免疫分析以及生物傳感檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

目前，在世界范圍內(nèi)仍有許多疾病困擾著人類，其中由乙型肝炎病毒（HBV）引起的乙型病毒性肝炎在發(fā)展中國家發(fā)病率高，嚴重威脅著人類的健康。據(jù)統(tǒng)計，全世界無癥狀乙肝病毒攜帶者超過2.8億，其中我國約占1.3億。乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是HBV感染后第一個出現(xiàn)的血清學標志物，也是診斷乙肝炎的重要指標之一，由于乙型病毒性肝炎的特點為起病較緩，不易被發(fā)現(xiàn)，因此在臨床研究上，采用快速、簡便、靈敏地檢測的方法對乙型病毒性肝炎的早期診斷、預防和治療具有十分重要的意義。

目前對于乙型肝炎表面抗原的檢測方法很多，如目前常用于檢測HBsAg的免疫分析方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附方法、放射免疫法、熒光標記物方法和電化學發(fā)光免疫分析方法等，但多數(shù)檢測方法繁瑣，操作復雜，費用昂貴，檢出限高。因此，建立一種快速、簡便、靈敏的檢測方法具有重要的臨床意義。

免疫傳感器是將免疫學方法與分析化學方法相結(jié)合的一種生物傳感器，通過抗原與抗體之間的特異性結(jié)合，使它具有靈敏度高、選擇性好、結(jié)構(gòu)簡單、操作簡便、易于小型化、可連續(xù)、快速自動化檢測分析等優(yōu)點。在臨床檢驗、環(huán)境監(jiān)測、食品安全控制、生物監(jiān)測等領(lǐng)域都有重要的應用價值。構(gòu)建電化學免疫傳感器的關(guān)鍵有兩點：其一是采用簡單、快速、有效的方法將抗原抗體等活性生物分子固定在電極表面；其二是開發(fā)傳感器的信號放大技術(shù)。

以1,1'-二茂鐵二甲酸（FcCOOH）作為前驅(qū)物合成的聚合物納米微球（PS），具有良好的生物相容性及導電性，能夠很好的固定抗體并加速電子傳遞，且具有較大的比表面積，能夠有效地負載氮摻雜石墨烯量子點功能化金鈀銅三合金(AuPdCu/N-GQDs)；氮摻雜石墨烯量子點（N-GQDs）有豐富的含氧基團，具有良好的水溶性，與金鈀銅三合金納米粒子（AuPdCu NPs）產(chǎn)生良好的協(xié)同作用，合成的AuPdCu/N-GQDs具有良好的催化性能，對于提高傳感器靈敏度具有重要作用。

本發(fā)明提供了一種基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫傳感器的制備方法及應用，實現(xiàn)了對乙型肝炎病毒標記物的靈敏檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是基于功能性納米材料AuPdCu/N-GQDs@PS，構(gòu)建了一種快速超靈敏的無標記型電化學免疫傳感器。

本發(fā)明的目的之二是將基于AuPdCu/N-GQDs@PS構(gòu)建的無標記型電化學免疫傳感器應用于乙型肝炎病毒標記物的檢測。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

1. 一種基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫傳感器的制備方法，其制備步驟如下：

（1）將直徑為4 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

（2）取6 μL、2.0 ~ 4.0 mg/mL的AuPdCu/N-GQDs@PS溶液滴加到電極表面，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，晾干；

（3）繼續(xù)將6 μL、8 ~ 12 μg/mL乙型肝炎表面抗體anti-HBs溶液滴加到電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（4）繼續(xù)將3 μL、0.5 ~ 1.5 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；