[發(fā)明專利]一種基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫傳感器的制備方法及應用

有效

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• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN107677716B
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發(fā)明（設計）人: 劉青;顏芹;劉會;董云會
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/36;G01N27/30;G01N33/569;G01N33/576;G01N33/543
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1.一種基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下幾個步驟：

（1）將直徑為4 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

（2）取6 μL、2.0 ~ 4.0 mg/mL的AuPdCu/N-GQDs@PS溶液滴加到電極表面，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，晾干；

（3）繼續(xù)將6 μL、8 ~ 12 μg/mL乙型肝炎表面抗體anti-HBs溶液滴加到電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（4）繼續(xù)將3 μL、0.5 ~ 1.5 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（5）將6 μL、10 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同濃度的乙型肝炎表面抗原HBsAg溶液滴涂在電極上，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干，制得一種基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫傳感器；

所述AuPdCu/N-GQDs的制備，步驟如下：

①N-GQDs的制備：2 g檸檬酸和1 g的雙氰胺混合，加入5 mL超純水，然后，將混合物轉移到25 mL的不銹鋼高壓反應釜中，在反應溫度160 ~ 200 ℃，加熱10 ~ 14 h，最終將產(chǎn)品分散在100 mL超純水中，以10000 rpm轉速，離心10 min，除去粒徑大的粒子，收集上清溶液，得到N-GQDs；

②AuPdCu/N-GQDs的制備：13.9 mg氯化銅，10.6 mg氯化鈀和0.5 mL質量分數(shù)為1%的氯金酸溶解在2.5 mL、0.5 mol/mL的鹽酸中，超聲30 min，然后將3 ~ 7 mL、20 mg/L的N-GQDs溶液混合至上述溶液中，在磁力攪拌下用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為10，將混合物轉移至高壓反應釜中，反應溫度160 ~ 200 ℃，反應時間為4 ~ 8 h，得沉淀物，以8000 rpm轉速，每次10min離心洗滌3次，25 ℃真空干燥12 h，得到AuPdCu/N-GQDs；

所述PS和AuPdCu/N-GQDs@PS的制備，步驟如下：

①PS的制備：5 mg的1,1'-二茂鐵二甲酸FcCOOH溶解于5 mL甲醇中，超聲分散至均勻，然后將溶液暴露在陽光下照射1 ~ 3 h，在陽光的照射下分解為缺質子化的Fc-COO^–和Fe³⁺，配位聚合后，溶液顏色由黃色變?yōu)楹稚a(chǎn)生沉淀，離心，用乙醇洗滌三次，25 ℃真空干燥6h，將PS保存在pH = 6.98的PBS中備用；

②AuPdCu/N-GQDs@PS的制備：AuPdCu/N-GQDs通過靜電引力固定在PS上，首先，1.0 mL帶負電荷的PS溶液和1.0 ~ 3.0 mL帶正電荷的聚乙烯亞胺溶液分散在5.0 mL超純水中，震蕩1 h，離心分離得到帶正電荷的PS溶液，再加入0.5 ~ 1.5 mL制備好的帶負電荷的AuPdCu/N-GQDs溶液，震蕩1 h，然后用超純水離心洗滌，25 ℃真空干燥12 h，得到AuPdCu/N-GQDs@PS。

2.如權利要求1所述的制備方法制備的一種基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫傳感器，用于乙型肝炎表面抗原HBsAg的檢測，檢測步驟如下：

（1）使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L、pH 5.84 ~ 8.04的磷酸鹽緩沖溶液中進行測試；

（2）用時間-電流法對分析物進行檢測，輸入電壓為-0.4 V，取樣間隔0.1 s，運行時間400 s；

（3）當背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L、pH = 6.81的磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化。