[發明專利]一種辨別鯉魚三種肌肉細胞的組織學方法

有效

• 申請號: 201710865926.0
• 申請日: 2017-09-22
• 公開（公告）號: CN107831112B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 梁佳
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: G01N21/00
• 分類號: G01N21/00;G01N1/42;G01N1/30;G01N1/06
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

本發明公開了一種辨別鯉魚三種肌肉細胞的組織學方法，具體步驟為：將處理后的樣品用異戊和液氮凍結；將樣品低溫冷凍后切片，室溫干燥；將切片放入恒溫的前處理液中處理，然后用清洗液清洗；將切片中加入清洗液，至恒溫后倒出，加入相同溫度的ATPase反應液反應，用蒸餾水清洗、浸漬；將切片依次用CaCl₂溶液、CoCl₂溶液、硫化銨溶液浸泡，中間浸泡結束后用蒸餾水清洗、浸漬；吸取切片多余水分，蓋上蓋玻片，封片后用光學顯微鏡觀察，即可辨別鯉魚三種肌肉細胞。有益效果為：本發明辨別方法得到的顯微鏡圖像中紅色肉細胞、粉色肉細胞和白色肉細胞分界線明顯，能夠清晰地辨別鯉魚三種肌肉細胞的分布。

技術領域

本發明涉及顯微觀察樣品技術領域，尤其是涉及一種辨別鯉魚三種肌肉細胞的組織學方法。

背景技術

鯉魚是淡水魚中分布最廣、產量最多的魚類之一，由于鯉魚脂肪含量低、蛋白質含量豐富，成為人們最喜歡的淡水魚類之一。鯉魚肌肉中最小的結構單位為肌纖維，每一條肌纖維就是一個細胞。相較比其他動物，魚肉的肌纖維更短更細、蛋白質組織松散、水分含量高、肌纖維，密度更大，這些結構上的特征致使魚肉比其他動物的肌肉更柔軟，因此經常被作為動物性蛋白資源制作食品原料。但是基于上述特征，鯉魚肉也更易被降解，在低溫冷藏過程中使得鯉魚肌肉軟化，進而則會在短時間內導致肌肉的品質下降。因此，研究不用類型肌肉的軟化情況，對日常保存鯉魚肉和選育優良品種的鯉魚有著重要的意思。

鯉魚肌肉由紅色肉、粉色肉和白色肉組成，肉眼往往不能很好的區分，在分別分析這三種肌肉類型理化性質時，導致在采肉時不能完全把這些分開，進而導致不能正確的進行后續實驗，最終不能正確的分析研究這三種肌肉類型的理化性質。光學顯微鏡(OpticalMicroscope，簡寫OM)是利用光學原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，能看到的許多微小生物和構成生物的基本單元-細胞。因此，可以利用光學顯微鏡分辨鯉魚三種肌肉細胞。而為了對細肌肉胞進行觀察，通常要先對肌肉細胞進行染色，令細胞膜、細胞質和細胞核可以容易的在顯微鏡下觀察，肌肉細胞常用的染色方法有：HE染色和肌球蛋白ATP酶染色等。但是HE染色樣品制備過程中在染色時間、取材組織塊體積大小、氣溫等諸多方面對制作者的要求比較苛刻，且制備時間長。而由于肌球蛋白三磷酸腺苷酶（ATP）存在于肌肉中，因此可以利用ATP酶染色分辨鯉魚三種肌肉細胞的纖維類型和分布。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能保持肌肉細胞形態的完整性，能夠清晰地辨別紅色肉細胞、粉色肉細胞和白色肉細胞，保證分別采取三種類型肌肉的準確率，方便簡單的辨別鯉魚三種肌肉細胞的組織學方法。

本發明針對背景技術中提到的問題，采取的技術方案為：一種辨別鯉魚三種肌肉細胞的組織學方法，包括凍結、凍結、前處理、ATPase反應、發色、光學顯微鏡觀察，具體步驟為：