[發(fā)明專利]一種三聯(lián)吡啶釕-賴氨酸聚合物固相合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710862246.3
• 申請(qǐng)日: 2017-09-21
• 公開（公告）號(hào): CN107759799B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃曦;廖玉輝;趙釗艷;譚青琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號(hào): C08G83/00
• 分類號(hào): C08G83/00;C08G69/42
• 代理公司: 廣州凱東知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44259
• 代理人: 羅丹

本發(fā)明公開了一種三聯(lián)吡啶釕?賴氨酸聚合物固相合成方法，包括以下過程：將合成原料包含有賴氨酸的第一反應(yīng)底物經(jīng)過固相預(yù)處理過程，得到硫醇化的單體，再將硫醇化的單體與金基質(zhì)固定，此為第二反應(yīng)底物，第二反應(yīng)底物在去氨基保護(hù)后與第一反應(yīng)底物發(fā)生固相聚合過程，形成固定聚合物后，固定聚合物脫落金基質(zhì)，得到目標(biāo)產(chǎn)物，目標(biāo)產(chǎn)物經(jīng)過產(chǎn)物純化過程即為三聯(lián)吡啶釕?賴氨酸聚合物。本發(fā)明首創(chuàng)了一種基于固相合成原理合成三聯(lián)吡啶釕?賴氨酸聚合物的方法，通過改變賴氨酸氨基保護(hù)位置，獲得了線性或者樹狀聚合物。所得三聯(lián)吡啶釕?賴氨酸聚合物的聚合度可調(diào)，而且發(fā)光強(qiáng)度穩(wěn)定均一，為基于電化學(xué)發(fā)光原理的衡量分析方法提供有力的發(fā)光強(qiáng)度支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于電化學(xué)發(fā)光聚合物合成技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種三聯(lián)吡啶釕-賴氨酸聚合物固相合成方法。

背景技術(shù)

作為一種被廣泛應(yīng)用的電化學(xué)發(fā)光基團(tuán)，三聯(lián)吡啶釕分子在免疫分析及分子診斷領(lǐng)域發(fā)揮著日益重要的作用。然而，單個(gè)的三聯(lián)吡啶釕分子無法為痕量分析技術(shù)提供足夠的發(fā)光強(qiáng)度支持。因此，開發(fā)新型的具有電化學(xué)放大功能的線性三聯(lián)吡啶釕聚合物具有重要意義。申請(qǐng)人前期受聚賴氨酸聚合物啟發(fā)，構(gòu)建了一種線性三聯(lián)吡啶釕聚合的合成方法，并將其成功的運(yùn)用于腫瘤分子診斷領(lǐng)域，現(xiàn)已獲得授權(quán)(ZL)。但該方法所得產(chǎn)物聚合度無法做到絕對(duì)均一，波動(dòng)范圍較寬，無法得到單體數(shù)目均一的產(chǎn)物，從而出現(xiàn)發(fā)光強(qiáng)度不一致的現(xiàn)象，為了使線性三聯(lián)吡啶釕聚合物在分子診斷、生物分析相關(guān)領(lǐng)域得到更好的應(yīng)用及推廣，申請(qǐng)人開發(fā)了一種分子量均一可控、自動(dòng)化的線性三聯(lián)吡啶釕聚合物合成方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明在于提供一種電化學(xué)發(fā)光性能穩(wěn)定、分子量可控的一種三聯(lián)吡啶釕-賴氨酸聚合物固相合成方法，為電化學(xué)發(fā)光相關(guān)分子診斷及生物分析方法提供了有效的信號(hào)給出基團(tuán)。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：線性三聯(lián)吡啶釕-賴氨酸聚合物固相合成方法包括合成反應(yīng)過程、固相預(yù)處理過程、固相聚合過程以及產(chǎn)物純化過程，如圖1所示，其具體過程如下：

合成反應(yīng)過程：三聯(lián)吡啶釕-賴氨酸單體的合成由羧基活化的三聯(lián)吡啶釕(TBR)和單一氨基保護(hù)的賴氨酸通過酰胺鍵形成穩(wěn)定連接而實(shí)現(xiàn)，此為第一反應(yīng)底物。羧基活化三聯(lián)吡啶釕和單一氨基保護(hù)的賴氨酸摩爾比為1:1，反應(yīng)條件為37℃過夜孵育攪拌12h。

固相預(yù)處理過程包括單體的硫醇化和單體鏈端的固定。單體的硫醇化通過以下兩個(gè)步驟實(shí)施：

第一步，單體羧基活化：三聯(lián)吡啶釕-賴氨酸單體和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)的摩爾比為1:10～1:100，優(yōu)選為1:100，在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)的催化條件下，60℃攪拌孵育1h。

第二步，單體的硫醇化：羧基活化的三聯(lián)吡啶釕-賴氨酸單體與氨基乙硫醇之間通過酰胺鍵連接，二者反應(yīng)的摩爾比為1:1。

單體鏈端的固定：采用金-硫鍵連接硫醇化的三聯(lián)吡啶釕-賴氨酸單體和金基質(zhì)，此為第二反應(yīng)底物。第二反應(yīng)底物通過金-硫鍵連接使后續(xù)的延伸過程、終止過程以及純化過程得以簡(jiǎn)化。

固相聚合過程：固相合成的聚合以固定后的單體鏈端為起始，通過程序化控制，使三聯(lián)吡啶釕-賴氨酸單體逐個(gè)聚合形成線性鏈，主要過程包括氨基去保護(hù)過程、聚合過程和終止過程：

氨基去保護(hù)過程：向第二反應(yīng)底物中加入反式脂肪酸(TFA)溶液，攪拌反應(yīng)五分鐘后，用雙蒸水清洗，得到氨基去保護(hù)的第二反應(yīng)底物。第二反應(yīng)底物的鏈端被Boc氨基保護(hù)，能夠通過加入反式脂肪酸(TFA)定點(diǎn)打開和封閉，從而實(shí)現(xiàn)精確的分子間連接。