[發(fā)明專利]一種防治馬鈴薯枯萎病的菌株及其制劑的制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710862006.3
• 申請日: 2017-09-21
• 公開（公告）號: CN107603906B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 唐廣輝;趙鋼勇;顧欣燕;孫海遠(yuǎn);閆輝敏
• 申請（專利權(quán)）人: 天津坤禾生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/125
• 代理公司: 天津市尚文知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12222
• 代理人: 張東浩

1.一種防治馬鈴薯枯萎病的菌株，其特征是：該菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)MES810，保藏在中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2017年8月10日，保藏編號為CGMCCNo.14514。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治馬鈴薯枯萎病的菌株對應(yīng)的制劑的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

(1)菌種活化：在250mL錐形瓶中裝入50mL無菌水，挑取斜面菌種于錐形瓶中，搖勻，取1-2mL液體至500mL克氏瓶中，克氏瓶中事先裝入100mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，116℃-121℃濕熱滅菌20-35min，將克氏瓶置于32℃-36℃條件下培養(yǎng)24-36h，得活化菌種；

(2)一級種子液的制備：將以上盛有活化菌種的克氏瓶取出，倒入50-100mL無菌水，刮取菌胎制成菌懸液，將其全部倒入裝有100-300mL且溫度為4℃的無菌水的種子瓶中，得一級種子液；

(3)二級種子液的制備：在300L發(fā)酵罐中裝有150L二級種子培養(yǎng)基，將100-300mL一級種子液接種于二級種子培養(yǎng)基中；在30℃-38℃培養(yǎng)12-24h；得到二級種子培養(yǎng)液；

(4)發(fā)酵罐發(fā)酵：在3000L發(fā)酵罐中裝入發(fā)酵罐容積50％-60％的枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，115℃-122℃濕熱滅菌20-40min，將150L或200L二級種子液全部接種于枯草芽抱桿菌活菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，控制罐壓0.02MPa-0.07MPa，在30℃-38℃培養(yǎng)24-36h后，出料得到防治馬鈴薯枯萎病的發(fā)酵液制劑；

所述牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基具體為，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)計：牛肉膏0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，氯化鈉0.2-1％，營養(yǎng)瓊脂1.5％-2.0％，余量為水，培養(yǎng)基pH為6.0-7.5；

所述二級種子培養(yǎng)基的成分為，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)計：葡萄糖0.3％-2％，玉米粉1％-5％，豆粕粉1％-5％，磷酸氫二鈉0.1‰-0.5‰，磷酸二氫鈉0.5‰-5‰，消泡劑0.2‰-2‰，余量為水，培養(yǎng)基pH調(diào)為6.0-7.5，并在115℃-122℃濕熱滅菌20-40min備用；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)計：葡萄糖0.3％-2％，玉米粉1％-5％，豆粕粉1％-5％，磷酸氫二鈉0.1‰-0.5‰，磷酸二氫鈉0.5‰-5‰，消泡劑0.2‰-2‰，余量為水，培養(yǎng)基的pH調(diào)為6.0-7.5，并在115℃-122℃濕熱滅菌20-40min。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的防治馬鈴薯枯萎病制劑的制備方法制備的制劑的使用方法，其特征在于，將馬鈴薯枯萎病的發(fā)酵液制劑稀釋100-300倍，然后按照5kg/畝用量與基肥一同施入土壤中后，開始種植馬鈴薯。