[發(fā)明專利]一種檢測(cè)CA50的診斷試劑盒及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710861825.6
• 申請(qǐng)日: 2017-09-21
• 公開（公告）號(hào): CN109541200A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李楠;張巍;黃加喜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州新波生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/535
• 分類號(hào): G01N33/535;G01N33/533
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 竺路玲

本發(fā)明的一種檢測(cè)CA50的診斷試劑盒采用雙抗體夾心法的免疫吸附試驗(yàn)原理，結(jié)合時(shí)間分辨免疫熒光技術(shù)定量檢測(cè)糖類抗原50；可以用于胰腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌的輔助診斷和治療效果的監(jiān)測(cè)；同時(shí)本發(fā)明的試劑盒還具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、穩(wěn)定性優(yōu)異、可測(cè)定范圍寬、檢測(cè)自動(dòng)化程度高和無環(huán)境污染等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及腫瘤癌抗原免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測(cè)糖類抗原50的診斷試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

糖類抗原(CA50)是一種以唾液酸脂和唾液酸糖蛋白為主的糖蛋白，廣泛存在于上皮組織腫瘤中，主要用于胰腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌的輔助診斷，其中胰腺癌病人升高最明顯。CA50常用于治療后的跟蹤監(jiān)控，當(dāng)CA50持續(xù)升高時(shí)，提示腫瘤可能有殘留或者轉(zhuǎn)移。潰瘍性結(jié)腸炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也會(huì)出現(xiàn)CA50的升高。

目前檢測(cè)CA50的方法主要有：酶免ELISA法和化學(xué)發(fā)光CLIA法。酶免ELISA法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、不需要復(fù)雜的儀器、只需要進(jìn)行簡(jiǎn)單的培訓(xùn)即可進(jìn)行操作，但是由于平臺(tái)所限，其靈敏度相對(duì)較低，測(cè)定范圍相對(duì)較窄，而且一般檢測(cè)窗口期較長(zhǎng)。化學(xué)發(fā)光CLIA法優(yōu)點(diǎn)是靈敏度、特異性較高，檢測(cè)范圍較寬；缺點(diǎn)是由于大多數(shù)板式CLIA試劑盒仍采用EIA相同的酶促反應(yīng)，以辣根酶或堿性磷酸酶交聯(lián)抗體，使用魯米諾或金剛烷等作為底物，檢測(cè)的是動(dòng)態(tài)發(fā)光，導(dǎo)致檢測(cè)信號(hào)值衰減較快、高濃度和低濃度信號(hào)衰減速度不一致，限制了其在免疫定量分析中的低端檢測(cè)靈敏度、穩(wěn)定性和重復(fù)性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題提出的一種兼具靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、可測(cè)定范圍寬、試劑有效期長(zhǎng)、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)的檢測(cè)CA50的時(shí)間分辨免疫熒光診斷試劑盒及其制備方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案為：

一種檢測(cè)CA50的診斷試劑盒，包括包被反應(yīng)板，還包括鑭系元素離子標(biāo)記的抗CA50單抗；所述包被反應(yīng)板為吸附有抗CA50單抗的微孔板。

為了優(yōu)化上述技術(shù)方案，本發(fā)明采取的技術(shù)措施還包括：

進(jìn)一步地，本發(fā)明的檢測(cè)CA50的診斷試劑盒還包括校準(zhǔn)品、緩沖液、洗滌液、熒光增強(qiáng)液。

優(yōu)選地，本發(fā)明中所述鑭系元素離子為Eu³⁺、Tb³⁺、Sm³⁺、Dy³⁺中的至少一種，更優(yōu)選為為Eu³⁺。

優(yōu)選地，本發(fā)明使用的熒光增強(qiáng)液含有β-二酮類化合物或芳香胺類化合物。

另一方面，本發(fā)明還提供制備上述檢測(cè)CA50的診斷試劑盒的方法，包括下述步驟：

步驟1：制備預(yù)處理包被反應(yīng)板

使用黑色聚苯乙烯制備板架，預(yù)留與酶標(biāo)板相互配合的通孔；酶標(biāo)板經(jīng)過鈷60輻照30天后，與板架配合組裝，獲得預(yù)處理包被反應(yīng)板，備用；

步驟2：包被板的獲得

用碳酸鹽緩沖液將抗CA50單抗稀釋至1-4μg/mL，以100μL/孔包被過夜，然后洗滌、封閉、干燥，將微孔板真空密封于鋁箔袋內(nèi)，冷藏備用；

步驟3：制備鑭系元素離子標(biāo)記的抗CA50單抗

抗CA50單抗經(jīng)碳酸鹽緩沖液透析后，與鑭系元素離子按2:1比例混合，靜置24-48小時(shí)，用Sephadex S-200分離柱純化，得到鑭系元素離子標(biāo)記的抗CA50單抗，用保存液將上述鑭系元素離子標(biāo)記的抗CA50單抗保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟4：熒光增強(qiáng)液的配制