[發明專利]一種血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法及檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710861621.2
• 申請日: 2017-09-21
• 公開（公告）號: CN107389950A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 張淵;倪小琴;胡星海
• 申請（專利權）人: 蘇州新波生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海申新律師事務所31272
• 代理人: 竺路玲

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法及檢測試劑盒。

背景技術

氨基末端腦利鈉肽前體(簡稱為NT-proBNP)來自心室肌細胞，最初合成的為前腦利鈉肽原(pre-proBNP)，是由134個氨基酸組成的多肽鏈。前腦利鈉肽原在心肌細胞中裂解為腦利鈉肽前體(proBNP，108個氨基酸)和信號肽(26個氨基酸)。腦利鈉肽前體(proBNP)進入血液后裂解為具有活性的BNP和NT-proBNP，理論上兩者是1：1的關系。

BNP作用于參與鈉調節、維持血壓動態平衡的組織，促進尿鈉排泄和利尿；擴張血管；拮抗腎素、血管緊張素、醛固酮系統的作用。BNP的產生和分泌可能為心臟的一種良性應激或者代償機制，用來調節心臟的功能，BNP由于心室受到牽拉刺激或者張力升高而分泌，能夠早期反映整體甚至局部心臟結構改變導致的功能變化。引起循環BNP和NT-proBNP水平升高的主要病理生理機制是左室整體收縮或舒張功能受損而使左室壁受到的牽拉力增加所致。此外，BNP和NT-proBNP水平升高不僅反映了室壁張力的增加，也是心肌缺血的直接后果，所以臨床上將NT-proBNP作為理想的心衰標志物。

NT-proBNP的檢測對心腦血管疾病的診斷及治療有著重要的價值。可在無癥狀的患者中對早期/輕度心臟功能不全進行早期篩查；對心源性及非心源性呼吸困難的患者進行鑒別診斷；是心衰病人的診斷及臨床預后最敏感的預測指標，還可以判斷心衰患者對藥物治療的反應。

目前，通常采用免疫熒光雙抗體夾心法定量檢測人全血、血清或血漿中氨基末端腦利鈉肽前體(NT-proBNP)的濃度，上海飛測生物開發了的一種檢測方法，其具體檢測方法如下：

■檢測試劑由測試卡、緩沖液、ID芯片和使用說明書組成，測試卡由試紙條和塑料盒組成；試紙條的主要成分：包被有NT-proBNP單克隆抗體和兔IgG的硝酸纖維素膜、吸水紙、PVC板及其他支持物；

■緩沖液含有熒光標記NT-proBNP單克隆抗體和熒光標記抗兔IgG；

■測試過程：吸取75微升樣本，加入裝有緩沖液的離心管中，充分混勻1分鐘，從中吸取75微升加入測試卡的加樣孔中，室溫反應15分鐘后，免疫熒光檢測儀上讀數；

■檢測范圍：0-22000pg/mL；

■批內精密度：變異系數CV≤15％。

但上述的檢測方法存在1)加樣量較多、2)測量范圍窄、以及3)批內精密度差的缺陷，為心腦血管疾病的診斷及治療帶來一定困難。因此，對已有技術所存在的缺陷進行改進，使其在NT-proBNP臨床檢測時能夠發揮更為有效的作用至關重要。

發明內容

本發明為解決現有技術中的上述問題，提出一種血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法及檢測試劑盒，解決了NT-proBNP檢測加樣量較多的問題，在不降低靈敏度的情況下拉寬了檢測范圍，提高了產品批內精密度。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明的第一個方面是提供一種血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法，包括步驟：

1)用鏈霉親和素包被磁珠，得包被有鏈霉親和素的磁珠；

2)用生物素標記氨基末端腦利鈉肽前體單克隆第一抗體；

3)將步驟1)包被有鏈霉親和素的磁珠與步驟2)標記有生物素的氨基末端腦利鈉肽前體單克隆抗體結合反應，得磁珠-SA-生物素-NT-proBNP單抗溶劑；

4)用氨基末端腦利鈉肽前體單克隆第二抗體標記吖啶酯，制得吖啶酯-NT-proBNP單抗溶劑；

5)將步驟3)制得的磁珠-SA-生物素-NT-proBNP單抗溶劑與NT-proBNP結合后，再與步驟4)制得的吖啶酯-NT-proBNP單抗溶劑發生結合反應，形成雙抗體夾心復合物；

6)將該雙抗體夾心復合物經清洗后，使形成帶有可檢測的信號生成物質，檢測樣本中氨基末端腦利鈉肽前體的含量。

進一步地，在所述的血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法中，步驟1)中所述磁珠與所述鏈霉親和素的質量比為1:5-1:50。

進一步地，在所述的血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法中，步驟2)中所述氨基末端腦利鈉肽前體單克隆第一抗體與所述生物素的質量比為1:10-1:100。

進一步地，在所述的血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法中，步驟3)中所述磁珠包被鏈霉親和素與所述生物素標記抗體的質量比為150:1-250:1。