[發明專利]一種血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法及檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710861621.2
• 申請日: 2017-09-21
• 公開（公告）號: CN107389950A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 張淵;倪小琴;胡星海
• 申請（專利權）人: 蘇州新波生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海申新律師事務所31272
• 代理人: 竺路玲

1.一種血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法，其特征在于，包括步驟：

1)用鏈霉親和素包被磁珠；

2)用生物素標記氨基末端腦利鈉肽前體單克隆第一抗體；

3)將步驟1)包被有鏈霉親和素的磁珠與步驟2)標記有生物素的氨基末端腦利鈉肽前體單克隆第一抗體結合反應，得磁珠-SA-生物素-NT-proBNP單抗溶劑；

4)用氨基末端腦利鈉肽前體單克隆第二抗體標記吖啶酯，制得吖啶酯-NT-proBNP單抗溶劑；

5)將步驟3)制得的磁珠-SA-生物素-NT-proBNP單抗溶劑與待測NT-proBNP結合之后，再與步驟3)制得的吖啶酯-NT-proBNP單抗溶劑發生結合反應，形成雙抗體夾心復合物；

6)將該雙抗體夾心復合物經清洗后，使形成帶有可檢測的信號生成物質，檢測樣本中氨基末端腦利鈉肽前體的含量。

2.根據權利要求1所述的血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法，其特征在于，步驟1)中所述磁珠與所述鏈霉親和素的質量比為1:5-1:50。

3.根據權利要求1所述的血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法，其特征在于，步驟2)中所述氨基末端腦利鈉肽前體單克隆第一抗體與所述生物素的質量比為1:10-1:100。

4.根據權利要求1所述的血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法，其特征在于，步驟3)中所述磁珠包被鏈霉親和素與所述生物素標記抗體的質量比為150:1-250:1。

5.根據權利要求1所述的血液中氨基末端腦利鈉肽前體的檢測方法，其特征在于，步驟4)中所述氨基末端腦利鈉肽前體單克隆第二抗體與所述吖啶酯的質量比為1:5-1:20。

6.一種用于如權利要求1-5任一項所述檢測方法的檢測試劑盒，其特征在于，包括由若干并排設置的孔位組成的試劑條，所述試劑條包含的試劑有磁珠-SA-生物素-NT-proBNP單抗溶劑、吖啶酯-NT-proBNP單抗溶劑。

7.根據權利要求6所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑條上的一孔位內設有磁棒套。

8.根據權利要求6所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含校準品、磁珠清洗液以及預激發液。

9.根據權利要求8所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述磁珠清洗液是含有吐溫、防腐劑的Tris-HCl緩沖液。

10.根據權利要求8所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述預激發液是含有雙氧水、硝酸溶液；所述校準品是含有一定量的NT-proBNP抗原的酪蛋白酸鈉溶液。

11.根據權利要求6所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑條上的0號位設有磁棒套；1號位設有磁珠-SA-生物素-NT-proBNP單抗溶劑；3、5、6、7號位設有磁珠清洗液；4號孔位設有吖啶酯-NT-proBNP單抗溶劑；8號位設有預激發液。

12.一種如權利要求6-11任一項所述檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，檢測時，所述試劑條(4)置放于孵育倉(3)內，所述孵育倉(3)設置于輸送帶(2)上，所述輸送帶(2)連接水平位移電機(1)，所述輸送帶(2)的末端設有分析讀數模塊(13)；并采用可相對磁棒套(5)上下移動的上吸式磁珠轉移槍實現所述試劑條上取磁棒套、吸取磁珠、磁珠洗脫、磁珠混勻、磁棒套打脫動作；

所述上吸式磁珠轉移槍，包括可與所述磁棒套(5)過盈連接的提取槍槍頭(12)、位于所述提取槍槍頭(12)軸心線上用于吸附磁珠(16)的磁棒(15)，所述磁棒(15)由提取電機(10)驅動并相對所述提取槍槍頭(12)上下移動；

具體包括如下使用步驟：

通過上吸式磁珠轉移槍提取0號位孔的磁棒套(5)，整個檢測在一個連體的試劑條(4)中進行，樣本加在2號位孔后，磁棒套將第1號位孔的磁珠-SA-生物素-NT-proBNP單抗提到2號位孔，完成第一步反應；反應結束后由磁棒(15)將結合物提取到3號位孔的清洗液中清洗，洗去未結合的樣本；清洗結束后由磁棒套(5)將結合物提取到4號位孔開始第二步反應，反應結束后由磁棒套(5)將結合物依次通過5、6、7號位進行三次清洗，最終提取到8號位孔的預激發液中，添加激發液讀取信號值。