[發明專利]與黃瓜果實軟刺基因Ts共分離的InDel?Ts3分子標記及其應用

在審

• 申請號: 201710860785.3
• 申請日: 2017-09-21
• 公開（公告）號: CN107586869A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 蔡潤;潘俊松;王剛;何歡樂;郭春立;肖婷婷;孫敬賢;朱文瑩;張琪
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 上?？剖⒅R產權代理有限公司31225
• 代理人: 褚明偉

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域的分子標記，特別涉及一種與黃瓜果實軟刺基因Ts共分離的InDel-Ts3分子標記。

背景技術

黃瓜(Cucumis sativus L.)是葫蘆科(Cucurbitaceae)甜瓜屬(Cucumis)一年蔓生的草本植物，黃瓜作為世界十大重要的蔬菜作物之一，也是我國主栽蔬菜作物之一。

果實是黃瓜經濟性狀最重要的部分，黃瓜果實屬于瓠果，由子房和花托共同發育而成。在黃瓜果實上有一個重要的性狀是果刺，果刺是黃瓜特化的表皮毛。到目前為止，黃瓜表皮毛基因的研究相對較少。2015年，Zhao J L等利用mict微毛突變體和野生型雜交獲得的7936株F₂群體，利用BSA法將Mict基因定位在黃瓜第3號染色體遺傳距離為71.13kb的區間內。詳細結果請參看：Zhao J L等在《Journal of integrative plant biology》(植物生理學報)2015年第57卷925-935頁發表的題為《Micro-trichome as a class I homeodomain-leucine zipper gene regulates multicellular trichome development in Cucumis sativus.》(微毛基因作為I型亮氨酸同源拉鏈基因調控黃瓜多細胞表皮毛發育)一文。同年，Wang Y L等利用tril無毛突變體和野生型雜交獲得的1058株F₂群體，通過BSA法將控制表皮毛起始發育的Tril基因定位在黃瓜6號染色體UW007183和UW007211標記之間，遺傳距離為37.4kb，詳細結果請參看：Wang Y L等在《Theoretical and Applied Genetics》(理論應用遺傳學)2015年第129卷305-316頁發表的題為《Identification and mapping of Tril,a homeodomain-leucine zipper gene involved in multicellular trichome initiation in Cucumis sativus》一文。

Mict基因(micro-trichomes)和Tril基因(trichome-less)分別控制黃瓜微毛性狀和無毛性狀，由于果刺是表皮毛的特化，因此mict突變體的果刺性狀特點是小果刺，tril突變體的果刺性狀特點是無果刺。Tril基因隱性上位于Mict基因。CsTTG1基因平行并直接作用于Tril基因，來調控黃瓜表皮毛的形成。因此，黃瓜果實軟刺基因Ts的研究將為其他作物及黃瓜的表皮毛發育機制的研究奠定基礎。

隨著人們生活水平的提高，品質育種已提到重要位置。黃瓜果刺性狀屬于感觀品質范疇。歐美溫室類型的黃瓜為無果瘤、少刺的果皮，稱其為水果黃瓜，其市場價格為普通黃瓜的2-3倍。外觀光滑黃瓜污染少，清洗方便，食用衛生，是無公害蔬菜的理想品種。經檢測表明：無瘤少刺黃瓜果肉農藥殘留量比有刺黃瓜低27％，果皮農藥殘留量低18％。黃瓜軟刺柔軟不刺激，易脫落，增強了植株的抗逆性，是消費者的更佳選擇?；騎s控制軟刺的形成，它的研究將會推動品質育種進程。用與目的性狀緊密連鎖的分子標記進行標記輔助選擇在黃瓜遺傳育種中是十分有效的方法，分子標記是在DNA水平上對目標性狀進行選擇，具有高效、快速、不受環境條件限制等優點，可在苗期進行選擇，加快育種的進程。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種與黃瓜果實軟刺基因Ts共分離的InDel-Ts3分子標記及其應用。本發明利用分子標記和BSA(Bulked Segregant Analysis)法，提供了與黃瓜軟刺基因Ts共分離的分子標記。本發明的分子標記可簡便、快速、高通量地應用于育種實踐。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種與黃瓜果實軟刺基因Ts共分離的InDel-Ts3分子標記，該分子標記具有序列表SEQ ID NO.1所示的244個核苷酸序列，以及序列表SEQ ID NO.2所示的234個核苷酸序列，其中SEQ ID NO.1中的核苷酸序列與軟刺基因共分離，SEQ ID NO.2中的核苷酸序列與硬刺基因共分離。該分子標記的特征在于與軟刺基因共分離，該分子標記具有高穩定性，可以簡便、快速、高通量地應用于世界各地黃瓜硬刺/軟刺類型的篩選。

所述分子標記由ME7所示的上游引物和EM8所示的下游引物擴增得到，引物由上海華津生物科技有限公司合成。