[發(fā)明專利]血清中25?羥基維生素D2/D3雙流路平行液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用含量檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710860420.0
• 申請日: 2017-09-21
• 公開（公告）號: CN107478761A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任彪;李長坤;李月琪;黃濤宏
• 申請（專利權(quán)）人: 島津企業(yè)管理（中國）有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司11429
• 代理人: 張祥明

1.血清中25-羥基維生素D₂/D₃含量檢測方法，其特征在于，包括步驟：

(1)樣品前處理：向加入內(nèi)標(biāo)工作液的血清樣品中依次加入飽和硫酸鋅溶液和乙腈，震蕩，靜置，加入正己烷，震蕩，離心，取上層有機(jī)層，吹干，復(fù)溶配成甲醇溶液；

(2)利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析檢測，其中，液相色譜采用第一平行液相和第二平行液相進(jìn)行雙樣品交替分析，任一平行液相分析的同時(shí)另一平行液相洗平衡，任一平行液相完成數(shù)據(jù)采集時(shí)，另一平行液相立即開始采集數(shù)據(jù)，以實(shí)現(xiàn)連續(xù)數(shù)據(jù)采集，流動(dòng)相包括A相和B相，A相為質(zhì)量濃度0.1％的甲酸水溶液，B相為含質(zhì)量濃度0.1％的甲酸和2mmol/L乙酸銨的甲醇溶液；分析和洗平衡的梯度洗脫時(shí)間程序分別如表1和表2所示。

表1.分析的梯度洗脫時(shí)間程序

表2.洗平衡的梯度洗脫時(shí)間程序

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)的具體方法是：取100μL血清樣品于1.5mL離心管中，加入10μL內(nèi)標(biāo)工作液，充分混勻；再加入飽和硫酸鋅溶液100μL；加入200μL乙腈；劇烈震蕩30秒，室溫靜置15分鐘；加入1mL正己烷，劇烈震蕩30秒，14000g以上離心5分鐘；取最上層有機(jī)層600μL，室溫下氮?dú)獯蹈桑尤?5％甲醇溶液200μL，充分混勻30秒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)工作液的配制方法如下：用甲醇配制濃度為1000μg/mL的D6-25-OHD₂和D6-25-OHD₃的混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，再用甲醇稀釋為濃度為25ng/mL的內(nèi)標(biāo)工作液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中的液相色譜采用島津Nexera MX系統(tǒng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中的質(zhì)譜采用三重四極桿質(zhì)譜儀。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中的液相色譜條件如下：

色譜柱：Shim-packXR-C8

流速：0.4mL/min

柱溫：25℃

進(jìn)樣量：20μL

自動(dòng)進(jìn)樣器溫度：4℃

閥切換時(shí)間：0.15min.。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中的質(zhì)譜條件如下：

表3.MRM參數(shù)