[發明專利]一種副雞禽桿菌的保護性抗原、及其表達和應用

有效

• 申請號: 201710858074.2
• 申請日: 2017-09-21
• 公開（公告）號: CN107529534B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 王宏俊;梅晨;李淑芳;張培君;龔玉梅;黃明明;李桂萍
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/31;C12N15/74;C12N1/21;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/46
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 楊靜;王加嶺

本發明涉及家禽傳染病防疫領域，具體涉及一種用于副雞禽桿菌的保護性抗原、及其表達和應用。該用于副雞禽桿菌的保護性抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。還公開了表達副雞禽桿菌的保護性抗原蛋白的表達載體及其構建方法。該表達載體可在食品級的乳酸乳球菌中獲得表達。本發明還提供了用于副雞禽桿菌的保護性抗原的應用，用于制備雞傳染性鼻炎疫苗。該疫苗能夠明顯增強雞對A，B，C三種血清型副雞禽桿菌的抵抗力，其保護效果優于全菌滅活疫苗，可以用來預防不同血清型副雞禽桿菌引起的雞傳染性鼻炎。

技術領域

本發明涉及家禽傳染病防疫技術領域，具體涉及一種副雞禽桿菌的保護性抗原、及其表達和應用。

背景技術

雞傳染性鼻炎(Avian infectious coryza)是由副雞禽桿菌(Avibacteriumparagallinarum，Apg)感染引起的禽類最重要的呼吸疾病之一。發病雞主要表現為流涕、眼瞼腫脹以及溢淚等臨床癥狀。雞傳染性鼻炎可以導致雞產蛋期延遲、產蛋量降低，從而給養殖戶造成重大經濟損失。

Apg屬于巴氏桿菌科的短小革蘭氏陰性桿菌，基本特征為無運動性、菌體呈多形性、其中強毒株帶有莢膜。Page等人將Apg分為A、B和C三種血清型，研究表明Apg的三個血清型均有不同程度的致病能力，但三者滅活菌體間不存在型間交叉免疫保護作用，即接種一種血清型的Apg并不能避免另外兩種血清型的Apg的感染。

為了預防雞傳染性鼻炎肆虐，目前廣泛使用Apg的滅活疫苗，這些疫苗是通過以福爾馬林、硫柳汞等為防腐劑滅活Apg而獲得的。目前國際上普遍使用的Apg滅活疫苗絕大多數囊括A型和C型。隨著大量B型的Apg在國內外陸續發生和流行，國際上已有較大的疫苗公司開始提供包含A、B、C三種血清型的三價滅活疫苗。由于副雞禽桿菌屬于苛生菌，培養成本高導致常規滅活菌苗成本居高不下；此外，副雞禽桿菌含有脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)等毒素物質，大量接種帶來的毒副作用會影響雞生長與產蛋，同時會導致接種的雞中形成局灶性的壞死斑。雞傳染性鼻炎滅活疫苗對野外雞群的預防效果約為70-80％，但在其效力檢驗中由于環境和評價方法的差異可能會有不同的結果。

為了研發更為安全有效的疫苗，有學者進行遺傳重組技術制備重組疫苗的研究。例如，Ryuichi Sakamoto等人通過克隆表達副雞禽桿菌A型和C型的外膜蛋白，獲得重組蛋白可用于分別抵抗雞傳染性鼻炎A型和C型感染的保護性抗原。然而，在設計用于制備疫苗的重組抗原時，由于篩選Apg三種血清型共有且具有中和活性的抗原表位存在一定難度，能同時抵抗副雞禽桿菌A、B、C三種血清型保護性抗原鮮有報道。另外，大腸桿菌原核表達的重組蛋白含有大量內毒素，重組蛋白用作抗原時必須要有專門的去除工藝與之配套，費時、費力，操作難度大。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明的一個目的是提供了一種用于副雞禽桿菌的保護性抗原，利用該抗原制備的疫苗能同時有效預防副雞禽桿菌的A、B、C三種血清型病原菌感染家禽。本發明的另一個目的是提供副雞禽桿菌的保護性抗原的表達載體及其表達的重組乳酸乳球菌，其有別于大腸桿菌表達系統，內毒素含量低。本發明的再一目的是提供副雞禽桿菌的保護性抗原的應用。為實現上述目的，本發明采用以下的技術方案為：

一種副雞禽桿菌的保護性抗原蛋白，所述抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一種編碼如上所述的保護性抗原蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

一種用于表達副雞禽桿菌的保護性抗原的表達載體，所述表達載體中插入有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

如上所述的表達載體，優選地，所述表達載體為乳酸乳球菌表達載體。進一步地，所述表達載體為食品級表達載體pNZ8149。

一種用于表達副雞禽桿菌的保護性抗原的重組菌，所述重組菌含有如上所述的表達載體。