[發(fā)明專利]一種副雞禽桿菌的保護(hù)性抗原、及其表達(dá)和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710858074.2
• 申請(qǐng)日: 2017-09-21
• 公開（公告）號(hào): CN107529534B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王宏俊;梅晨;李淑芳;張培君;龔玉梅;黃明明;李桂萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京市農(nóng)林科學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K14/195
• 分類號(hào): C07K14/195;C12N15/31;C12N15/74;C12N1/21;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/46
• 代理公司: 北京智為時(shí)代知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11498
• 代理人: 楊靜;王加嶺

1.一種用于副雞禽桿菌的保護(hù)性抗原蛋白，其特征在于，所述抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種編碼如權(quán)利要求1所述的保護(hù)性抗原蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一種用于表達(dá)副雞禽桿菌的保護(hù)性抗原的表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體中插入有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

4.如權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體為乳酸乳球菌表達(dá)載體。

5.一種用于表達(dá)副雞禽桿菌的保護(hù)性抗原的重組菌，其特征在于，所述重組菌含有如權(quán)利要求3或4所述的表達(dá)載體。

6.如權(quán)利要求5所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌的原始細(xì)胞為食品級(jí)乳酸乳球菌。

7.一種用于表達(dá)副雞禽桿菌的保護(hù)性抗原的重組菌的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟：

(1)、將目的片段La2與質(zhì)粒PUC-57經(jīng)雙酶切和回收后，進(jìn)行連接，構(gòu)建PUC-57-La2載體；其中，所述目的片段La2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示序列，在其上游和下游分別具有NcoI和SacI的酶切位點(diǎn)；

(2)、分別用限制酶NcoI和SacI雙酶切所述PUC-57-La2載體及表達(dá)載體pNZ8149，回收純化酶切片段，并用T4 DNA連接酶進(jìn)行定向連接，連接產(chǎn)物用于電穿孔法轉(zhuǎn)化乳酸乳球菌NZ3900菌株感受態(tài)細(xì)胞；

(3)、采用Elliker選擇培養(yǎng)基對(duì)所述步驟(2)轉(zhuǎn)化后的感受態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)，篩選陽性轉(zhuǎn)化菌，鑒定陽性轉(zhuǎn)化菌標(biāo)度的副雞禽桿菌的保護(hù)性抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，則所述陽性轉(zhuǎn)化菌為制備的用于表達(dá)副雞禽桿菌的保護(hù)性抗原的重組菌。

8.如權(quán)利要求1所述的副雞禽桿菌的保護(hù)性抗原蛋白在制備雞傳染性鼻炎疫苗中應(yīng)用。

9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括采用含有用于表達(dá)副雞禽桿菌的保護(hù)性抗原蛋白的L.lactis NZ3900-pNZ8149-La2重組菌進(jìn)行免疫。