[發明專利]均環肽Cyclo-(Cys)6

有效

• 申請號: 201710851622.9
• 申請日: 2017-09-19
• 公開（公告）號: CN107474118B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 宋宏濤;張雅婷;安友;黃瑋
• 申請（專利權）人: 中國工程物理研究院核物理與化學研究所
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/16
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 鄭健

本發明公開了一種均環肽Cyclo?(Cys)₆的制備方法，包括：(1)樹脂與帶保護基的半胱氨酸進行反應連接，形成連接有一個半胱氨酸的樹脂；(2)樹脂連接的一個半胱氨酸與帶保護基的半胱氨基酸連續縮合，形成連接有直鏈肽的樹脂；(3)直鏈肽從樹脂上切割下來，首尾相連環化，得到環肽粗品；(4)環肽的純化與保存。本發明所制備的Cyclo?(Cys)₆為由單一氨基酸所形成的均環肽結構，具有與冠醚類化合物極其類似的結構，分子在結構上具有很好的規整性及多向對稱性，更易于自組裝成為離子通道或者納米管，從而作為藥物載體、膜通道、分子器件等；側鏈上含有多個巰基官能團，使得其具有更好的反應活性，可作為高效點擊反應的前體試劑；同時，工藝合理、操作簡捷，且合成效率較高。

技術領域

本發明屬于多肽合成技術領域，涉及環肽類化合物的固相化學制備方法，尤其涉及環肽化合物環肽Cyclo-(Cys)₆及其合成制備工藝。

背景技術

環肽在結構組成上與普通鏈狀肽類具有結構的高度相似性，但因其主體結構中氨基酸殘基參與連接成環，以致分子中的游離羧基、氨基等親水基團消失或減少，使得其極性降低、脂溶性增強、對體內氨/羧肽酶的敏感性降低、在生物體內的穩定性增加；同時，肽鏈運動的自由度減少，在溶液中具有相對穩定的明確構象，與受體契合的可能性明顯提高。

現有技術中，合成環肽首先是合成鏈狀肽前體。鏈狀肽的合成方法目前主要有固相法和液相法兩種合成方式，由于固相法獨特的優勢，已成為實驗室多肽合成的首選方法，直鏈肽的合成已趨自動化和商業化，但環肽的合成還存在著一定的難度，其關鍵問題在于鏈狀肽的合環步驟。通常環狀肽的合環方式分為首尾相連、側鏈之間相連、側鏈與端基相連，或借助于二硫鍵、酯鍵(宓鵬程,潘俊峰,馬亞平,袁建成.一種環酯肽Orafamide A的固相合成方法.CN 103626848 B[P].2013-11-29)等相連；其中，鏈狀肽首尾相連成環的合成難度更大，但也更具有研究意義。通常情況下，合成首尾相連型環肽的經典方法是在稀溶液(10^-3～10^-4mol.L^-1)中，用活潑酯法或疊氮法將帶有保護基的的線性前體肽選擇性地活化并合環；使用二環己基碳二亞胺(DCC)、 4-二甲氨基吡啶(DMAP)等有機縮合劑，產率通常低于30％，且反應時間很長。

近年來，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、1-羥基苯并三氮唑(HOBt)、 O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)等苯并唑類有機縮合劑的使用，為環肽合成方法的研究提供了很大幫助；但迄今為止，主要應用于 RGD環肽(含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的環肽)的合成(王錫平.RGD合成制備工藝.CN,103588863B[P].2013-11-15.)，尚未見有關新型均環肽 Cyclo-(Cys)₆，尤其是其化學制備方法相關工藝的報道。

發明內容

本發明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優點。

為了實現根據本發明的這些目的和其它優點，提供了一種均環肽 Cyclo-(Cys)₆的制備方法，包括：

步驟一、將樹脂溶脹后除去溶劑，取氨基帶芴甲氧羰酰基保護基和側鏈巰基帶三苯甲基保護基的半胱氨酸、N,N-二異丙基乙胺加入樹脂中，再加入 DMF使之溶解，室溫下震蕩反應30～60min；然后加入甲醇孵育20min；用 DMF和甲醇溶劑反復清洗樹脂并抽掉溶劑，第一個氨基酸連接在樹脂上；去掉溶劑后，加入裂解液，去除半胱氨酸氨基上的保護基芴甲氧羰酰基；取樣檢測確保氨基酸已經連接在樹脂上，且已裸露出不帶保護的氨基；