[發明專利]高熒光強度的熒光探針的合成方法及用其進行β受體激動劑檢測的方法

有效

• 申請號: 201710847777.5
• 申請日: 2017-09-19
• 公開（公告）號: CN107505301B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 周鑫魁;洪霞;錢瀅文;高志瑩;王杰斌;何海寧
• 申請（專利權）人: 甘肅省商業科技研究所有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N30/02
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 張克勤

本發明公開了一種高熒光強度的熒光探針的合成方法及用其進行β受體激動劑檢測的方法，屬于食品安全檢測領域。該高熒光強度的熒光探針的合成方法，以2,3?萘二胺、苯甲酰氯為反應物，以1?丁基?3?甲基咪唑六氟磷酸鹽為催化劑制得。該熒光探針熒光強度高，合成簡便，針對含有氨基化合物反應特異性強。所生成的熒光探針與β?受體激動劑衍生速度快，熒光強度高。增加該類藥物檢測靈敏度，降低了檢測成本。

技術領域

本發明屬于食品安全檢測領域，具體涉及一種高熒光強度的熒光探針的合成方法及用其進行β受體激動劑檢測的方法。

背景技術

β-受體激動劑被廣泛使用在禽畜飼養過程中，可以促進動物生長，提高瘦肉產率。但長期使用會富集在動物組織中，人食用該動物組織會產生很嚴重的毒副作用，從而危害人類健康。國家食品安全領域強制執行檢測動物源性制品中萊克多巴胺、沙丁胺醇、克倫特羅三種傳統的β-受體激動劑，而對新型的β-受體激動劑暫時沒有相應的檢測標準，如：西馬特羅、苯乙醇胺A、特布他林、福莫特羅等等。上述β-受體激動劑都存在共同的特征結構，即苯乙醇胺。

目前已報到的文獻中，對β-受體激動劑的檢測方法有酶聯免疫法、膠體金免疫法，免疫學方法針對性強，速度快，但是同時只能檢測其中一種物質。液相色譜-質譜串聯法，該方法靈敏度高，重復性好，但對儀器設備要求高，操作繁瑣，不適合基層實驗室操作。氣相色譜-質譜串聯法，該方法的分離效果沒有液相色譜良好。液相色譜-紫外檢測器法，該方法重復性良好，但是β-受體激動劑的紫外吸收不強，導致方法靈敏度受到限制，一般最低響應濃度為100ng/mL左右。液相色譜-熒光檢測器法，該方法克服了紫外檢測器靈敏度不高的缺點，最低響應濃度為10ng/mL左右。但是β-受體激動劑根據結構不同，并不是每種物質都有熒光性，如：克倫特羅、福莫特羅、苯乙醇胺A等物質熒光強度很弱甚至沒有。所以熒光檢測方法任然有很大的限制。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用離子液體催化合成的熒光強度高，反應位阻小，衍生速度快，易于得到的熒光探針的合成方法。

本發明的另一個目的是提供一種用高熒光強度的熒光探針進行β受體激動劑檢測的方法。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案如下：

一種高熒光強度的熒光探針的合成方法，以2,3-萘二胺、苯甲酰氯為反應物，以1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽為催化劑制得。

進一步地，其具體步驟為，

A、按質量比分別稱取反應物2,3-萘二胺7.8-8.2份，苯甲酰氯6.8-7.2份，催化劑1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽0.8-1.2份，均勻攪拌30min，得到混合溶液；

B、用14.8-15.2份pH值為2的鹽酸水溶液萃取上述混合溶液，3次；合并鹽酸溶液;

C、用8-12%氫氧化鈉水溶液調節鹽酸溶液pH值為10，此時會析出白色晶體狀沉淀,過濾，用冷水多次洗滌濾餅;

D、用45-55%的乙醇水溶液將濾餅重結晶，干燥，得到白色針狀晶體，即為2-苯基萘并咪唑;

E、取6.8-7.2份氯磺酸于圓底燒瓶中，在冰鹽浴中充分冷卻，加入步驟D制得的2-苯基萘并咪唑2.8-3.2份，充分攪拌，60℃加熱溶解10min迅速倒入冰水中，靜止，此時有針狀沉淀析出，過濾，用冰水洗滌濾餅，干燥，得到黃色針狀晶體1-(4-磺酰氯基苯基)萘并咪唑。

上述的熒光探針進行檢測的方法，包括如下步驟：

步驟1：試劑準備，將0.2mol/L鹽酸溶液，20g/L氯化鈉溶液，甲醇按體積比1:1:1混合，得到樣品提取液，該樣品提取液可以有效的從動物源性制品中將目標物萃取到液相中，又不會溶解大量油脂等雜質影響實驗結果；