[發明專利]一種檢測EB病毒的多重熒光定量PCR方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201710847726.2
• 申請日: 2017-09-19
• 公開（公告）號: CN107354239B
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 曹素梅;陳曉霞;謝尚杭
• 申請（專利權）人: 中山大學腫瘤防治中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種用于檢測EB病毒的多重熒光定量PCR引物和探針，其特征在于，包括檢測EBNA1基因的引物對EB-F/R和探針EB-VIC，檢測Bam HI-W基因的引物對BW-F/R和探針BW-FAM及檢測內參基因β-actin的引物對UF/R和探針TU-ROX，其序列依次如SEQ ID NO：1～9所示；所述EBNA1基因，Bam HI-W基因和內參基因探針的5’端分別標記有熒光素VIC，FAM和ROX。

2.權利要求1所述引物和探針在檢測EB病毒的非疾病診斷目的或在制備EB病毒檢測試劑盒中的應用。

3.一種檢測EB病毒的非疾病診斷目的的多重熒光定量PCR方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.提取樣本基因組DNA；

S2.用權利要求1所述引物和探針SEQ ID NO：1～9對S1的基因組DNA進行多重熒光定量PCR擴增反應，得到PCR擴增曲線；

S3.根據S2的擴增曲線進行結果分析。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟S2所述多重熒光定量PCR的擴增體系中各組分總濃度如下所示：10x ExTaq bμffer 1x～5x，MgCL₂ 0.2～2mmol/L，dNTP 100～400μmol/L，BSA 100～300μg/μL，甜菜堿1～3mol/L，EB-F 8pg/μL，EB-R 8pg/μL，EB-VIC4pg/μL，BW-F 4pg/μL，BW-R 4pg/μL，BW-FAM 2pg/μL，UF 2pg/μL，UR 2pg/μL，TU-ROX 1pg/μL，ExTaq酶0.1～0.2U/μL，ddH₂0補充至25μL。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟S2所述多重熒光定量PCR的擴增程序為：95℃5min；94℃30s，62℃30s，共45個循環。

6.權利要求3～5任一所述方法在制備EB病毒檢測試劑盒中的應用。

7.一種檢測EB病毒的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述引物和探針。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包含EB病毒陽性質粒。

9.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包含熒光定量PCR所需的試劑。

10.權利要求7～9任一項所述試劑盒在EB病毒檢測中的非疾病診斷目的的應用。