[發(fā)明專利]一種鑒定家養(yǎng)綿羊是否含有盤羊血緣的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710847511.0
• 申請日: 2017-09-19
• 公開（公告）號: CN107766698B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周明亮;楊平貴;陳明華;龐倩
• 申請（專利權(quán)）人: 四川省草原科學(xué)研究院
• 主分類號: G16B30/00
• 分類號: G16B30/00;G16B20/20;G16B10/00;C12Q1/6888
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種鑒定家養(yǎng)綿羊是否含有盤羊血緣的方法。包括：個體DNA提取；Primer 5.0軟件設(shè)計包含綿羊mtDNA D?Loop序列的引物，以提取的DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物測序，DNAstar軟件對測序結(jié)果進(jìn)行整理、拼接、組裝；從NCBI數(shù)據(jù)庫中下載家養(yǎng)綿羊mtDNA D?loop單倍型A和B的序列及摩弗侖羊、東方盤羊、羱羊、盤羊維式亞種、盤羊哈薩克斯坦亞種、盤羊蒙古亞種、盤羊西藏亞種和盤羊指名亞種的序列；ClustalW軟件對以上序列進(jìn)行多重比對，Mega 6.06的Neighbor?Joining程序構(gòu)建進(jìn)化關(guān)系樹，以此準(zhǔn)確鑒定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種鑒定家養(yǎng)綿羊是否含有盤羊血緣的方法。

背景技術(shù)

家養(yǎng)綿羊(Ovis aries)是最早被馴化的動物之一，為人類提供了大量的肉、毛、皮等生產(chǎn)資料。關(guān)于家養(yǎng)綿羊的起源，一般的觀點認(rèn)為家養(yǎng)綿羊與野生綿羊擁有共同的祖先。古生物學(xué)家、動物遺傳學(xué)家通過考古、個體形態(tài)比較和解剖學(xué)等特征認(rèn)為家養(yǎng)綿羊與野生綿羊存在共同祖先，或存在血緣關(guān)系；細(xì)胞遺傳學(xué)揭示家養(yǎng)綿羊(2n＝54)與西伯利亞雪羊(2n＝52)、摩弗侖羊(歐洲摩弗侖羊和亞洲摩弗侖羊，2n＝54)、盤羊(2n＝56)、東方盤羊(2n＝58)等野生綿羊的染色體數(shù)目上存在差異，但在我國新疆、西藏、青海等地區(qū)，家養(yǎng)綿羊與野生盤羊可以繁殖后代。在我國西部地區(qū)的西藏羊的地方類群中，一些地方類群(賈洛羊)在體型、外貌、角型等特征方面與野生盤羊具有相似之處，通過體型、外貌和角型等特征來判斷如賈洛羊類群含有野生盤羊的血緣或由盤羊直接馴化而來。

Sry基因是位于哺乳動物Y染色體上的一個父系遺傳基因，采用其CDS序列分析阿勒泰羊、藏系賈洛羊、藏系歐拉羊與家養(yǎng)綿羊、盤羊及摩弗侖羊的親緣關(guān)系，認(rèn)為阿勒泰羊、藏系賈洛羊、藏系歐拉羊與普通綿羊、盤羊及摩弗倫羊存在相同的Sry基因序列，起源于共同的祖先或賈洛羊由盤羊馴化而來。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：1)通過體型、外貌、角型等可視特征來判斷西藏羊的地方類群的馴化或起源，不能客觀地從物種本身解決這些地方類群是否起源于盤羊或含有盤羊的血緣；2)Sry基因的CDS序列高度保守，進(jìn)化速度較慢，不宜于用該基因來解決西藏羊的地方類群起源于盤羊或含有盤羊血緣。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種鑒定家養(yǎng)綿羊是否含有盤羊血緣的方法。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種鑒定家養(yǎng)綿羊是否含有盤羊血緣的方法，所述鑒定家養(yǎng)綿羊是否含有盤羊血緣的方法包括以下步驟：

步驟一，賈洛羊血樣樣品或組織樣品的采集，個體DNA提取；

步驟二，依據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中登錄號為NC001941的家養(yǎng)綿羊mtDNA全序列，采用Primer 5.0設(shè)計引物，以賈洛羊的DNA樣本為模板，進(jìn)行mtDNA D-loop全序列的PCR擴(kuò)增；

步驟三，擴(kuò)增的mtDNA D-loop的PCR產(chǎn)物，送測序公司進(jìn)行mtDNA D-loop序列的測序，DNAstar軟件進(jìn)行賈洛羊mtDNA D-loop的測序結(jié)果進(jìn)行整理、拼接、組裝；

步驟四，從NCBI數(shù)據(jù)庫中下載家養(yǎng)綿羊mtDNA D-loop單倍型A和單倍型B的序列及歐洲野綿羊-摩弗侖羊、東方盤羊、羱羊、盤羊維式亞種、盤羊哈薩克斯坦亞種、盤羊蒙古亞種、盤羊西藏亞種和盤羊指名亞種序列；

步驟五，采用ClustalW軟件進(jìn)行線粒體D-Loop的多序列比對，Mega 6.06的Neighbor-Joining程序構(gòu)建摩弗侖羊、東方盤羊、羱羊及盤羊各亞種的進(jìn)化關(guān)系樹，判斷摩弗侖羊、東方盤羊、羱羊及盤羊各亞種等是否與賈洛羊的單倍型A、單倍型B和單倍型C歸為一類，確定賈洛羊與摩弗侖羊、東方盤羊、羱羊及盤羊各亞種間存在共同的祖先或共有血緣關(guān)系。