[發明專利]一種同步測定乳粉中L-抗壞血酸、D-抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的方法

有效

• 申請號: 201710847380.6
• 申請日: 2017-09-19
• 公開（公告）號: CN107664672B
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 崔玲君;孫海新;孫丕春;周延培
• 申請（專利權）人: 山東世通檢測評價技術服務有限公司;青島大學
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/86
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本發明提供一種同步測定乳粉中L?抗壞血酸、D?抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的方法，其中提取液使用除氧的硫代硫酸鈉和偏磷酸混合溶液，可以有效保護活性抗壞血酸，提高其穩定性，無需避光操作，實驗操作簡便，提取物在低溫條件下24h內性質穩定。本發明所涉及的色譜條件對色譜柱損傷較小，可延長色譜柱壽命；流動相由磷酸二氫鉀和癸胺構成，其濃度可以提高分離度，抗壞血酸濃度較高時，仍可以使2種同分異構體有效分離，避免彼此干擾，可準確測定活性抗壞血酸的含量。本發明操作簡單、化學試劑用量少、提取物穩定性好。檢測方法相對標準偏差為7.82％、可以多聯檢測，對于準確測定乳粉中活性抗壞血酸的真實含量具有重要意義。

技術領域

本發明屬于食品檢測技術領域，具體涉及一種同步測定乳粉中L-抗壞血酸、D-抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的方法。

背景技術

維生素C(又稱L-抗壞血酸，L-AA)，是人體每日膳食推薦供應量最大的一種維生素，人體自身不能合成，主要從食物中攝取。L-抗壞血酸有還原型和脫氫型兩種，還原型極不穩定，易被氧化成為脫氫型抗壞血酸(DHA)。D-抗壞血酸(D-AA)是L-AA的光學異構體，常被用作食品添加劑，然而其活性只有L-AA的5％。因此，要準確測定乳粉中抗壞血酸的含量，評價其抗氧化價值，需要將L-AA、D-AA、DHA區分測定。

目前，抗壞血酸的測定方法主要有碘量法、2,6-二氯靛酚滴定法，電化學分析法，苯肼比色法，熒光法等，以上方法只能檢測總抗壞血酸的含量,而沒有區分L-AA、D-AA、DHA的含量。現行高效液相色譜法可以區分測定L-AA、D-AA、DHA，但由于抗壞血酸的穩定性差，整個檢測過程需要避光，操作繁瑣。樣品提取方法繁瑣、提取物穩定性差、同分異構體L-AA和D-AA化學性質相似，色譜分離不佳等問題是目前液相色譜法測定抗壞血酸的關鍵問題所在。

而乳粉中抗壞血酸含量一般較高，因此要求色譜條件在抗壞血酸濃度較高時，可以有效分離L-AA與D-AA。使用現行的色譜條件測定乳粉中L-AA、D-AA、DHA通常存在隨著抗壞血酸濃度升高，L-AA與D-AA分離度降低，甚至出現平頂峰，保留時間漂移的問題，不利于精確定性和定量(圖1)。

發明內容

本發明針對上述問題，提供一種同步測定乳粉中L-抗壞血酸、D-抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的方法，本方法具有無需避光操作、線性范圍廣、化學試劑用量少、提取物穩定性好、回收率高、檢測限低、檢測結果重現性強、多聯檢測的優點，對于測定乳粉中活性抗壞血酸的真實含量具有重要意義。

本發明同時測定乳粉中L-AA、D-AA、DHA的方法，包括如下操作步驟：

1)樣品預處理：

A液制備：稱取待檢測的乳粉樣品置于具塞離心管中，加入經過氮吹除氧的提取液，渦旋溶解并定容；搖勻，超聲波處理后離心，吸取部分上清液，另一部分用于制備B液，經水相膜過濾后轉移至棕色瓶中，用于測定L-抗壞血酸和D-抗壞血酸含量；

所述的提取液由偏磷酸和硫代硫酸鈉構成，偏磷酸濃度為0.25mol/L，硫代硫酸鈉濃度為0.019mol/L；

所述超聲波處理條件為冰浴超聲3秒、間歇5秒，90～100個循環；

所述離心條件為0℃、9000r/min離心5min；

所述的水相膜為0.22μm水相膜；

B液制備：取A液制備中的離心后的上清液于具塞離心管中，加入還原劑，調節pH至7.0～7.2，振蕩；再調節pH至2.5～2.8，最后用純水定容后，溶液經過水相膜過濾后轉移至棕色瓶中，用于測定L-抗壞血酸的總量；

所述的還原劑為濃度為0.177mol/L L-半胱氨酸溶液；

所述的調節pH至7.0～7.2，是使用磷酸三鈉溶液調節pH至7.0～7.2；