[發明專利]一種同步測定乳粉中L-抗壞血酸、D-抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的方法

有效

• 申請號: 201710847380.6
• 申請日: 2017-09-19
• 公開（公告）號: CN107664672B
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 崔玲君;孫海新;孫丕春;周延培
• 申請（專利權）人: 山東世通檢測評價技術服務有限公司;青島大學
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/86
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1.一種同步測定乳粉中L-抗壞血酸、D-抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的方法，其特征在于，所述的方法包括如下操作步驟：

1)樣品預處理：

A液制備：稱取待檢測的乳粉樣品置于具塞離心管中，加入經過氮吹除氧的提取液，渦旋溶解并定容；搖勻，超聲波處理后離心，吸取部分上清液，另一部分用于制備B液，經水相膜過濾后轉移至棕色瓶中，用于測定L-抗壞血酸和D-抗壞血酸含量；

B液制備：取A液制備中的離心后的上清液于具塞離心管中，加入還原劑，調節pH至7.0~7.2，振蕩；再調節pH至2.5~2.8，最后用純水定容后，溶液經過水相膜過濾后轉移至棕色瓶中，用于測定L-抗壞血酸的總量；

所述的提取液由偏磷酸和硫代硫酸鈉構成，其中偏磷酸濃度為0.25mol/L，硫代硫酸鈉濃度為0.019mol/L；

所述的還原劑是濃度為0.177mol/L的 L-半胱氨酸溶液；

2)標準溶液配制及標準曲線的繪制：

分別稱取L-抗壞血酸、D-抗壞血酸標準品，用偏磷酸和硫代硫酸鈉混合液，溶解、定容配制成單標準品儲備液，再分別吸取單標準品儲備液配制成混合標準品儲備液；再用偏磷酸和硫代硫酸鈉混合液將混合標準品儲備液適當稀釋，配制系列混合標準品工作液，采用高效液相色譜儀進行分析，繪制標準曲線，計算標準回歸方程，結果如下：

L-抗壞血酸：y=46.8x+1.86；D-抗壞血酸：y=53.7x-8.35；線性范圍0.5mg/L~200mg/L；

所述的偏磷酸和硫代硫酸鈉混合液，其中偏磷酸濃度為0.25mol/L，硫代硫酸鈉濃度為0.019 mol/L；

3)將步驟1)所得樣品用高效液相色譜儀器檢測，將L-抗壞血酸、D-抗壞血酸的峰面積分別代入所述標準回歸方程，求得待測物濃度，記為C₁和C₂；

所述高效液相色譜條件為：Agilent G1260型高效液相色譜儀；Agilent反相色譜柱SB-C18；流動相由磷酸二氫鉀和癸胺配制而成，調節pH為2.5~2.8；超聲脫氣；色譜條件：檢測波長為245nm；流速為0.7ml/min；柱溫為27℃；進樣量為10μl；

所述的流動相中磷酸二氫鉀濃度為0.025mol/L，癸胺濃度為4.3mmol/L，流動相的pH為2.5~2.8；

4) 結果計算和表述

①將C₁和C₂代入下式計算試樣中L-抗壞血酸或D-抗壞血酸的含量

式中:

X_1，2 ——試樣中L-抗壞血酸或D-抗壞血酸的含量;

C_1，2——由標準回歸方程求得的試樣中L-抗壞血酸或D-抗壞血酸的質量濃度;

C₀ —由標準回歸方程求得空白試樣中L-抗壞血酸或D-抗壞血酸的質量濃度;

V ——試樣的最后定容體積;

m ——實際稱取樣品質量;

1000——換算系數;

100 ——換算系數；

②試樣中L-抗壞血酸的總量計算公式如下：

式中:

X ——試樣中總L-抗壞血酸的含量;

C——由標準回歸方程求得的試樣中總L-抗壞血酸的質量濃度;

C₀ —由標準回歸方程求得空白試樣中L-抗壞血酸或D-抗壞血酸的質量濃度;

V ——試樣的最后定容體積;

m ——實際稱取樣品質量;

1000——換算系數;

F——2.5，為還原步驟稀釋倍數；

100 ——換算系數 ；

③脫氫抗壞血酸含量=X-X₁

其中，X₁為L-抗壞血酸含量，由①中X₁計算得到； X為L-抗壞血酸的總量，由②中X計算得到。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）中的超聲波處理條件為冰浴超聲3秒、間歇5秒，90～100個循環。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）中的水相膜為0.22μm水相膜。