[發明專利]一種分泌抗赭曲霉毒素單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用

有效

• 申請號: 201710844559.6
• 申請日: 2017-09-19
• 公開（公告）號: CN107513522B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 何方洋;洪小栩;萬宇平;崔廷婷;袁媛;曹東山;南鐵貴;趙正苗
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/14;G01N33/577
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本發明提供了一種分泌抗赭曲霉毒素單克隆抗體的雜交瘤細胞株F?3?3，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.14303。此細胞株分泌的抗赭曲霉毒素單克隆抗體靈敏度高、特異性好、抗干擾性好，對赭曲霉毒素A的50％抑制濃度IC₅₀為0.990μg/L，對中藥中可能存在的真菌毒素、農藥、重金屬、炮制過程中使用的輔料及污染菌等均具有較好的抗干擾性，為中藥中赭曲霉毒素A的免疫檢測提供了條件，具有實際應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種分泌抗赭曲霉毒素單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用。

背景技術

中藥材從生產、采收、加工、運輸、貯藏等過程均有可能因自身性質與外界因素的影響而污染真菌，進而發生霉變并污染真菌毒素。霉變不僅會影響中藥材的質量，使藥材失去原有的藥用價值，造成巨大的經濟損失，而且在霉變過程中，產生的多種真菌毒素會對患者的肝、腎、神經和造血系統等造成嚴重的損害，甚至可能誘發癌癥。同時，隨著當今中醫藥保健養生觀念的普及，越來越多“藥食同源”的大宗中藥材被用于人們日常的飲食和保健當中，市場的需求量大，若這些中藥材受到真菌毒素的污染，則勢必會危害更多的人群的健康，加重個人和醫療系統的經濟負擔，更有可能進一步影響社會的和諧和穩定。

赭曲霉毒素(ochratoxin)是曲霉菌屬和青霉菌屬等產毒菌株產生的二級代謝產物，包括赭曲霉毒素A(OTA)、赭曲霉毒素B(OTB)、赭曲霉毒素C(OTC)、赭曲霉毒素D(OTD)、OTA的甲酯以及OTB的甲酯和乙酯等7種結構類似的化合物，均為異香豆素聯結L-苯丙氨酸的衍生物。赭曲霉毒素對農作物的污染在全球范圍內都比較嚴重，其中以赭曲霉毒素A在自然界分布最廣，污染水平最高，且毒性最強，不僅有致畸、致突變和致癌等作用，還具有免疫毒性、肝毒性和腎毒性，并被認為與巴爾干地方性腎病有關，因此與人類健康的關系最為密切。國際癌癥研究機構(IARC)在1993年將其定為2B類致癌物。由于赭曲霉毒素的危害嚴重，引起了各國的普遍重視。

OTA的含量通常很低，所以檢測手段要求較高。目前，用于測定OTA的方法有薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)等色譜法，其與質譜和核磁共振聯用技術正逐漸被用于十分特殊的測定和確定多種真菌毒素。這些方法檢測準確、檢測限低，但需要復雜的樣品前處理過程、專門的儀器以及專業的人員培訓，在實際應用中受到了很大的限制。

免疫分析法可以彌補以上所有缺點，免疫分析法是一種利用抗原抗體特異性結合反應檢測各種物質的分析方法，建立小分子化合物的免疫分析方法的關鍵是能夠制造出對小分子化合物具有高親和力和高特異性的抗體。

發明內容

本發明的目的是提供一種分泌抗赭曲霉毒素單克隆抗體的雜交瘤細胞株，該細胞株制備的單克隆抗體對OTA具有較好的特異性和較高的檢測靈敏度，對中藥中可能存在的真菌毒素、農藥、重金屬、炮制過程中使用的輔料及污染菌等均具有較好的抗干擾性，為建立中藥中OTA的免疫學檢測方法奠定基礎。

本發明的技術方案，一種分泌抗赭曲霉毒素單克隆抗體的雜交瘤細胞株，命名為赭曲霉毒素單克隆抗體雜交瘤細胞株F-3-3，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.14303，保藏日期為2017年06月15日。

抗赭曲霉毒素單克隆抗體，其是由保藏編號為CGMCC No.14303的赭曲霉毒素單克隆抗體雜交瘤細胞株F-3-3分泌產生的，所述抗赭曲霉毒素單克隆抗體應用于中藥中赭曲霉毒素A的分析檢測。

本發明提供F-3-3細胞株的基本制備過程：