[發明專利]一種用于牦牛親子鑒定和個體識別的基因分型檢測試劑盒有效
| 申請號： | 201710841911.0 | 申請日： | 2017-09-18 |
| 公開（公告）號： | CN107760789B | 公開（公告）日： | 2021-03-02 |
| 發明（設計）人： | 裴杰;郭憲;褚敏;包鵬甲;梁春年;丁學智;王宏博;吳曉云;閻萍 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249 | 代理人： | 姜司晨 |
| 地址： | 730000 甘肅省*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 牦牛 親子鑒定 個體 識別 基因 檢測 試劑盒 | ||
1.一種用于牦牛親子鑒定和個體識別的STR標記檢測試劑盒，其特征在于，所述STR標記檢測試劑盒中包括檢測如下14個STR基因座的引物，所述14個STR基因座為BM720、BM2113、CH28AC、CSSM036、CSSME070、HAUT24、HEL6、ILSTS006、ILSTS008、INRA037、SPS115、TGLA227、YAK07和YAK08，所述14個STR基因座分為五組，其組合方式與相應的PCR擴增引物如下：
第一組的3個基因座為CSSM036、HEL6、CSSME070，相應的PCR擴增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.1至SEQ ID No.6所示；CSSM036、HEL6和CSSME070的引物分別采用FAM、HEX和TAMRA熒光素進行標記；
第二組的3個基因座為BM720、YAK07、SPS115，相應的PCR擴增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.7至SEQ ID No.12所示；BM720、YAK07和SPS115的引物分別采用FAM、HEX和TAMRA熒光素進行標記；
第三組的3個基因座為CH28AC、INRA037、HAUT24，相應的PCR擴增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.13至SEQ ID No.18所示；CH28AC、INRA037和HAUT24的引物分別采用FAM、HEX和TAMRA熒光素進行標記；
第四組的3個基因座為ILSTS006、YAK08、TGLA227，相應的PCR擴增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.19至SEQ ID No.24所示；ILSTS006、YAK08和TGLA227的引物分別采用FAM、HEX和TAMRA熒光素進行標記；
第五組的2個基因座為BM2113、ILSTS008，相應的PCR擴增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.25至SEQ ID No.28所示；BM2113和ILSTS008的引物分別采用FAM和HEX熒光素進行標記。
2.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，
第一組STR基因座CSSM036、HEL6、CSSME070的PCR擴增引物組成第一組引物混合液，其中擴增引物的濃度依次為5.6μmol/L、7.9μmol/L和9.2μmol/L；
第二組STR基因座BM720、YAK07、SPS115的PCR擴增引物組成第二組引物混合液，其中擴增引物的濃度依次為6.3μmol/L、6.8μmol/L和9.1μmol/L；
第三組STR基因座CH28AC、INRA037、HAUT24的PCR擴增引物組成第三組引物混合液，其中擴增引物的濃度依次為5.7μmol/L、7.3μmol/L和9.4μmol/L；
第四組STR基因座ILSTS006、YAK08、TGLA227的PCR擴增引物組成第四組引物混合液，其中擴增引物的濃度依次為6.2μmol/L、7.5μmol/L和9.7μmol/L；
第五組STR基因座BM2113、ILSTS008的PCR擴增引物組成第五組引物混合液，其中擴增引物的濃度依次為5.9μmol/L和7.6μmol/L。
3.一種用于分析DNA樣品的14個STR基因座基因分型的非診斷方法，其特征在于，使用權利要求1或2所述的檢測試劑盒檢測牦牛DNA樣本，所述牦牛DNA樣本選自牦牛血液、組織樣品或精液樣品中的一種或多種。
4.一種如權利要求1或2所述檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）提取牦牛基因組DNA，基因組DNA濃度為20-500 ng/μL；
2）多重熒光PCR擴增：總反應體系為20μL，反應體系組成如下：
模板DNA 0.5μL，10×PCR反應緩沖液2.0μL，引物混合液0.5μL，ddH2O 17μL；
3）PCR反應條件如下：
第一組，95℃預變性5分鐘，95℃ 30秒、56.3℃ 30秒、72℃ 30秒，共35個循環，72℃保溫6分鐘；
第二組，95℃預變性5分鐘，95℃ 30秒、55.6℃ 30秒、72℃ 30秒，共35個循環，72℃保溫6分鐘；
第三組，95℃預變性5分鐘，95℃ 30秒、56.5℃ 30秒、72℃ 30秒，共35個循環，72℃保溫6分鐘；
第四組，95℃預變性5分鐘，95℃ 30秒、56.0℃ 30秒、72℃ 30秒，共35個循環，72℃保溫6分鐘；
第五組，95℃預變性5分鐘，95℃ 30秒、55.5℃ 30秒、72℃ 30秒，共35個循環，72℃保溫6分鐘；
4）將得到的每組PCR產物加入樣品板，再將樣品板裝入遺傳分析儀進行毛細管電泳；
5）利用GeneMapperTM 4.0軟件分析電泳數據，得到實際樣品的基因分型數據；
所述方法為非診斷用途。
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