[發明專利]一株高產脂肪酶的假單胞菌及其發酵產酶方法

有效

• 申請號: 201710838176.8
• 申請日: 2017-09-18
• 公開（公告）號: CN107488615B
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 王興吉;郭慶文;劉文龍;曹世源;佟新偉
• 申請（專利權）人: 山東隆科特酶制劑有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/20;C12R1/38
• 代理公司: 11617 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 栗華楠

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一株高產脂肪酶的假單胞菌及其發酵產酶方法。所述假單胞菌具體為假單胞菌(Pseudomonas sp.)LD?14，菌株保藏號為CGMCC No.14414。假單胞菌LD?14發酵生產脂肪酶的發酵液酶活達到25000U/mL至26000U/mL；所產脂肪酶最適pH范圍為8.5?10.0，最適作用溫度范圍為30℃?40℃，在20℃保溫1d后剩余酶活為80％，具有顯著的耐低溫性和耐堿性，可廣泛應用于工業生產。

技術領域：

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一株高產脂肪酶的假單胞菌及其發酵產酶方法。

背景技術：

脂肪酶(Triacylglycerol acylhydrolases,EC 3.1.1.3)是能在油水界面上水解甘油三酯的一類酶的總稱，其能水解三酰甘油酯為脂肪酸、二酸甘油酯、單酸甘油酯及甘油，其天然底物一般是不溶于水的長鏈脂肪酸?；ァ?/p>

脂肪酶主要來源于植物、動物、微生物，其中微生物脂肪酶廣泛存在于細菌、酵母和霉菌中，具有種類多、周期短、繁殖快、易發生遺傳變異的特點，且有比動植物脂肪酶更廣的作用溫度、作用pH和底物特異性，其可以在不需要輔酶的條件下催化酯類化合物的水解、醇解、酸解、酯交換及合成等，催化條件溫和、能耗低、副產物少，具有高效、高選擇性、環境友好等特點，改變了傳統的酯化或轉酯化反應所需要的高溫、強酸、強堿等相對苛刻的條件。微生物脂肪酶適合于工業化大生產，可生產出高純度制品，在基礎理論研究和實際應用中都具有重大價值。目前，脂肪酶的生產方法主要包括提取法和微生物發酵法，其中，微生物發酵法以其較高的得率、較低的成本以及來源廣泛的菌種資源而成為脂肪酶生產的首選方法。

脂肪酶及其改性制劑由于其本身酶學性質的特殊性，已在食品與營養品加工工業、油脂化工工業、日用化工產業、醫藥與農業、生物活性劑合成等許多領域得到廣泛應用。其廣泛的應用范圍，豐富的資源，在工業化生產中顯示出越來越重要的地位。

而現有技術中的脂肪酶最適反應溫度一般在40℃或更高，在30℃以下失活嚴重，因此，受酶活及酶適用條件的制約，目前現有技術脂肪合酶仍不能滿足工業生產的需求，所以選育一株高產脂肪酶的假單胞菌菌株，其發酵產品具有良好的耐堿和耐低溫性，生產成本低廉，對大規模推進各行業的機械化具有重大意義。

發明內容：

為了解決上述問題，本發明將提供一株高產脂肪酶的假單胞菌及其發酵產酶方法與脂肪酶，在確保假單胞菌發酵高產脂肪酶穩定性的同時，顯著提高脂肪酶良好的耐堿和耐低溫性。

本發明的目的是通過以下技術方案實現目的：

一株高產脂肪酶的假單胞菌，所述菌株為假單胞菌(Pseudomonas sp.)LD-14，菌株保藏號為CGMCC No.14414。

所述假單胞菌(Pseudomonas sp.)LD-14是通過對假單胞菌原始菌株進行常溫常壓等離子體誘變得到的，所述的假單胞菌LD-14已于2017年7月13日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏號為CGMCC No.14414，保藏地址為：中國北京市朝陽區北辰西路1號院3號,中國科學院微生物研究所，郵編：100101。

所述假單胞菌LD-14的菌落形態特征如下：圓形、乳白色、周邊整齊、呈凸透鏡狀、表面光滑、有色澤、不透明、有臭味。

本發明的另一目的在于提供上述假單胞菌LD-14的發酵產酶方法如下：

發酵罐培養：將種子液按照接種量6％(v/v)的比例接入發酵罐培養基，恒溫35℃，轉速200r/min，設置通風量：0至5h為0.25vvm、5h至20h為0.5vvm、20h至發酵結束為1.0vvm，發酵全程利用補料培養基控制發酵液pH值為6.8，發酵至酶活增長緩慢，菌體自溶嚴重時結束發酵，發酵周期為150h，得到最終發酵液；