[發(fā)明專利]一株高產(chǎn)脂肪酶的假單胞菌及其發(fā)酵產(chǎn)酶方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710838176.8
• 申請(qǐng)日: 2017-09-18
• 公開（公告）號(hào): CN107488615B
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王興吉;郭慶文;劉文龍;曹世源;佟新偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東隆科特酶制劑有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N9/20;C12R1/38
• 代理公司: 11617 北京瑞盛銘杰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 栗華楠

1.一株高產(chǎn)脂肪酶的假單胞菌，其特征在于，所述菌株為假單胞菌(Pseudomonas sp.)LD-14，菌株保藏號(hào)為CGMCC No.14414。

2.權(quán)利要求1所述假單胞菌在生產(chǎn)脂肪酶中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求2所述的假單胞菌在生產(chǎn)脂肪酶中的應(yīng)用，其特征在于，假單胞菌LD-14應(yīng)用于脂肪酶制備的發(fā)酵方法如下：將種子液按照接種量6％的比例接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基，恒溫35℃，轉(zhuǎn)速200r/min，設(shè)置通風(fēng)量：0至5h為0.25vvm、5h至20h為0.5vvm、20h至發(fā)酵結(jié)束為1.0vvm，發(fā)酵全程利用補(bǔ)料培養(yǎng)基控制發(fā)酵液pH值為6.8，發(fā)酵至酶活增長(zhǎng)緩慢，菌體自溶嚴(yán)重時(shí)結(jié)束發(fā)酵，發(fā)酵周期為150h；

所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基為：麥芽糖180g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，硫酸銨1.5g/L，硫酸鎂0.5g/L，玉米油20g/L，氯化鈣0.1g/L，磷酸氫二鉀0.3g/L，pH 6.8，121-123℃滅菌30min；

所述補(bǔ)料培養(yǎng)基為：麥芽糖漿450g/L，KH₂PO₄ 5g/L，玉米漿7g/L，玉米油40g/L，氯化鈣5g/L，pH 4.0，121-123℃滅菌30min。

4.權(quán)利要求3所述的假單胞菌在生產(chǎn)脂肪酶中的應(yīng)用，其特征在于，所述種子液的制備方法如下：將二級(jí)種子液按照接種量6％的比例接入種子罐培養(yǎng)基中，恒溫35℃，轉(zhuǎn)速200r/min條件下培養(yǎng)12-15h；

所述二級(jí)種子液的制備方法如下：將一級(jí)種子取一環(huán)接入種子培養(yǎng)基中，恒溫35℃，搖床轉(zhuǎn)速200r/min條件下培養(yǎng)48h，得二級(jí)種子液；

所述一級(jí)種子的制備方法如下：挑取一環(huán)假單胞菌LD-14接種于固體斜面培養(yǎng)基，35℃下恒溫培養(yǎng)36h，得一級(jí)種子。

5.權(quán)利要求4所述的假單胞菌在生產(chǎn)脂肪酶中的應(yīng)用，其特征在于，所述固體斜面培養(yǎng)基為：蛋白胨12g/L，酵母膏6g/L，瓊脂15g/L，氯化鈉1g/L，余量為水，pH 7.0，121℃滅菌20min；

所述種子培養(yǎng)基為：麥芽糖漿40g/L，蛋白胨5g/L，酵母膏5g/L，氯化鈉0.8g/L，硫酸鎂0.5g/L，氯化鈣0.1g/L，磷酸氫二鈉0.5g/L，余量為水，pH 6.8，121℃滅菌20min；

所述種子罐培養(yǎng)基為：葡萄糖80g/L，酵母膏15g/L，玉米漿5g/L，硫酸銨1g/L，硫酸鎂0.5g/L，磷酸二氫鉀1.5g/L，氯化鈣0.1g/L，pH 6.8，121-123℃滅菌30min。

6.權(quán)利要求3所述的假單胞菌的應(yīng)用，其特征在于，所述脂肪酶的提取與精制方法如下：

(1)將最終發(fā)酵液加入1～5％珍珠巖助濾劑，壓濾得到澄清壓濾酶液；

(2)用20000分子量超濾膜對(duì)所述澄清壓濾酶液進(jìn)行超濾濃縮，得到濃縮液；

(3)在上述濃縮液中加入20％的穩(wěn)定劑、0.45％的防腐劑，調(diào)節(jié)pH 8.5，然后進(jìn)行過濾除菌，即得到脂肪酶成品液體酶制劑；

所述穩(wěn)定劑為甘油，所述防腐劑為質(zhì)量比為1：2的山梨酸鉀和苯甲酸鈉。