[發明專利]一種加拿大糖槭組織培養快繁的方法

有效

• 申請號: 201710835544.3
• 申請日: 2017-09-15
• 公開（公告）號: CN107455261B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 傅松玲;朱瑩瑩;熊智慧;郭媛;王兆成;任媛;王敬楠
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 合肥鼎途知識產權代理事務所(普通合伙) 34122
• 代理人: 葉丹

1.一種加拿大糖槭組織培養快繁的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)外植體選擇

選取多年生健壯、無病蟲害的加拿大糖槭，以其當年生、未木質化的嫩枝作為外植體；

(2)外植體預處理

將步驟(1)中的外植體除去葉片、葉柄，75％酒精擦拭后，修剪成至少帶一個腋芽或頂芽的莖段，然后用洗潔精震蕩清洗；接著將莖段浸泡在純水中并置于溫度為18-22℃下的超聲波清洗器中處理，之后用純水沖洗；

(3)無菌體系的建立

將經步驟(2)處理后外植體在無菌操作臺中用75％酒精浸泡消毒，用無菌水沖洗，用0.1％氯化汞震蕩消毒，用無菌水沖洗，吸干，再切除莖段兩端消毒死亡部分后獲得無菌材料；

(4)誘導培養

在MS培養基的基礎上添加6-BA0.5mg/L，蔗糖30g，瓊脂6.5g，配置誘導培養基，調節誘導培養基pH至5.8；將步驟(3)無菌材料形態學下端插入誘導培養基中進行芽的分化誘導培養，促進芽的萌發和生長；

(5)增殖培養

在MS培養基的基礎上添加6-BA0.5mg/L，GA₃ 0.5mg/L，蔗糖30g，瓊脂6.5g，配置繼代培養基，調節繼代培養基pH至5.8，將步驟(4)中的加拿大糖槭腋芽整個接入繼代培養基進行增殖培養；

(6)根的誘導

在MS培養基的基礎上添加IBA0.5mg/L，蔗糖20g，瓊脂6.5g，配置生根培養基，調節生根培養基pH至5.8，將步驟(5)的幼苗接入生根培養基進行生根誘導；

(7)無菌苗的煉苗馴化

將步驟(6)的加拿大糖槭生根無菌苗從培養室移至溫室大棚培養，然后移入輕基質中繼續培育成完整的再生植株；其中輕基質由營養土、河沙和珍珠巖以2∶1∶1的體積比混合并用高錳酸鉀消毒制成。

2.根據權利要求1所述的一種加拿大糖槭組織培養快繁的方法，其特征在于：步驟(1)進行外植體時間為4中旬至6月中旬。

3.根據權利要求1所述的一種加拿大糖槭組織培養快繁的方法，其特征在于：步驟(2)具體步驟為：將步驟(1)中的外植體在不損傷腋芽和頂芽的基礎上除去葉片、葉柄，用紗布蘸取75％酒精擦拭1-2遍后，再修剪成3-5cm至少帶一個腋芽或頂芽的莖段，用洗潔精震蕩清洗2遍后，流水清洗8-10分鐘，接著將莖段浸泡在裝有純水的容器中并置于溫度為18-22℃下的超聲波清洗器中處理8-12分鐘，之后用純水沖洗1-2遍。

4.根據權利要求1所述的一種加拿大糖槭組織培養快繁的方法，其特征在于：步驟(3)的具體步驟為：將步驟(2)處理后外植體在無菌操作臺中用75％酒精浸泡20-40秒進行表面消毒，用無菌水沖洗1-2次，用0.1％氯化汞震蕩浸泡消毒2-3分鐘，用無菌水沖洗4-6次，吸干，再切除莖段兩端消毒死亡部分后獲得無菌材料。

5.根據權利要求1所述的一種加拿大糖槭組織培養快繁的方法，其特征在于：所述步驟(4)中芽的分化誘導控制培養溫度在24-26℃，光照時間12-14h/d，光照強度為2000-2500lx，光照培養20-30d。

6.根據權利要求1所述的一種加拿大糖槭組織培養快繁的方法，其特征在于：所述步驟(5)中壯苗培養溫度在24-26℃，光照時間12-14h/d，光照強度為2000-2500lx，培養20-30d。

7.根據權利要求1所述的一種加拿大糖槭組織培養快繁的方法，其特征在于：所述步驟(6)中根的培養溫度20-25℃，光照時間10-16h/d，光照強度為2000-2500lx，培養15-20d。