[發明專利]一種復合檢測抗原及其應用

在審

• 申請號: 201710835257.2
• 申請日: 2017-09-15
• 公開（公告）號: CN107632162A
• 公開（公告）日: 2018-01-26
• 發明（設計）人: 黃小燕;楊翔;李楊;茹志偉;樓建榮;周單
• 申請（專利權）人: 廣州市雷德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟

技術領域

本發明涉及生物免疫檢測技術領域，具體涉及一種復合檢測抗原及其應用，尤其涉及一種復合檢測抗原、檢測試劑盒及其在類風濕關節炎檢測上的應用。

背景技術

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種常見的且難以治愈的疾病，引起關節不可逆的損傷，發病后期往往導致患者殘疾，影響生活質量，喪失工作能力。其特征是持續的滑膜炎、全身性的炎癥和存在自身抗體。目前RA的病因和發病機制仍知之甚少，及時診斷、及早治療對于疾病的控制具有重要的意義。目前臨床上用于診斷RA的方法很多，2010年美國風濕協會(ACR)診斷標準中規定了關節受累數量和病程，以及生物因子(RF、CCP、CRP等)與RA密切相關。然而目前臨床上采用的CCP、RF、GPI、AKA等聯合診斷，仍有部分的RA患者(特別是早期RA患者)未能及時檢出。因此尋找RA相關的生物標志物得到持續的關注。

RA是一種自身免疫疾病，在其發病過程中許多功能蛋白發生了異常的翻譯后修飾，如瓜氨酸化、氨甲酰化、糖基化等。這些異常修飾的蛋白能激發體內免疫系統反應從而產生自身抗體。

迄今的研究已經證實，對RA特異性最高的自身抗體是針對含瓜氨酸表位的自身抗體，這些抗體被稱為含瓜氨酸蛋白抗體(ACPA)。有研究顯示，ACPA陽性和ACPA陰性的RA患者在遺傳基因、環境危險因素、疾病進展和緩解等方面都有所不同。過去的研究主要聚焦于ACPA陽性RA患者的病因學、病情進展和治療等方面，而對ACPA陰性的RA患者研究較少。

抗甲酰化蛋白抗體(CarP)是陳燚瓊等報道在RA患者體內檢測出的另一類新的自身抗體，不僅ACPA陽性的RA患者能檢測到抗CarP抗體，約30％ACPA陰性RA患者也能檢測到該抗體，而且有研究表明，抗CarP抗體可在RA確診前數年出現。

上述方法都采用單一的抗體進行檢測，檢測靈敏度不夠高，特異性不強，檢測結果不夠準確。

目前臨床診斷中的通常檢測自身抗體RF和CCP，RF在RA疾病中特異性比較低(低于80％)，而CCP2的特異性雖可達到90％以上，但其靈敏度卻僅有70％左右，而在早期RA患者中，CCP靈敏度只有不到50％，因此，RA診斷需要開發新的更具診斷意義的方法，以提高診斷結果的準確性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種復合檢測抗原及其應用，所述檢測抗原為瓜氨酸化蛋白與氨甲酰化蛋白的組合，能夠一次檢測多種RA自身抗體，克服了單一自身抗體檢測靈敏和特異性不足、以及多種自身抗體單次逐一檢測在操作上的繁瑣，大大提高了檢測效率和結果判斷的準確性。

為達到此發明的目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種檢測抗原，所述檢測抗原為瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白的組合抗原。

本發明中，發明人發現通過采用瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白進行組合來檢測，相比于采用單一的瓜氨酸化蛋白或單一的氨甲酰化蛋白檢測的檢測靈敏度明顯提高，兩種蛋白協同作用，共同檢測多種自身免疫性抗體，相比于采用其中一種蛋白作為檢測抗原，提高了檢測的效率和結果的準確性。

優選地，所述瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白的質量比為(5-8):(5-2)，例如可以是5:2、5:3、5:4、5:5、6:2、6:3、6:4、7:1、7:2、7:3、8:1、8:2、8:3、8:4、8:5，優選為8:2。

發明人發現，采用上述比例的瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白，可以最大限度的發揮瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白的協同作用，提高了檢測效率和結果的準確性。

優選地，所述組合抗原的工作濃度為1-20μg/mL，例如可以是1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL、5μg/mL、6μg/mL、7μg/mL、8μg/mL、9μg/mL、10μg/mL、11μg/mL、12μg/mL、13μg/mL、14μg/mL、15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL或20μg/mL，優選為2-10μg/mL。