[發(fā)明專利]長效重組豬FSH融合蛋白及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710833452.1
• 申請日: 2017-09-15
• 公開（公告）號: CN107540748B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅昊澍;師磊;韓國
• 申請（專利權(quán)）人: 北京偉杰信生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;A61K38/24;A61K47/68;A61P15/00
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.長效重組豬FSH融合蛋白，其特征在于，融合蛋白為pFSH-Fc-1或pFSH-Fc-2；

融合蛋白pFSH-Fc-1符合以下方程：(pFSHβ:pFSHα-L-Fc)₂，其中pFSHβ是指豬FSH去除信號肽的β亞基；冒號代表豬FSHβ亞基和α亞基以范德華力連接的關(guān)系；pFSHα是指豬FSH去除信號肽的α亞基；L代表pFSHα或pFSHβ亞基與Fc片段的連接關(guān)系；Fc是指免疫球蛋白的Fc片段或其突變體；括號外下標(biāo)2代表所述融合蛋白為二價(jià)同二聚體；所述pFSHα-L-Fc的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示；

融合蛋白pFSH-Fc-2符合以下方程：(pFSHα:pFSHβ-L-Fc)₂，其中pFSHβ是指豬FSH去除信號肽的β亞基；冒號代表豬FSHβ亞基和α亞基以范德華力連接的關(guān)系；pFSHα是指豬FSH去除信號肽的α亞基；L代表pFSHα或pFSHβ亞基與Fc片段的連接關(guān)系；Fc是指免疫球蛋白的Fc片段或其突變體；括號外下標(biāo)2代表所述融合蛋白為二價(jià)同二聚體；所述pFSHβ-L-Fc氨基酸序列如SEQ ID No.8所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述pFSHα的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示，所述pFSHβ的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

3.表達(dá)盒、表達(dá)載體、克隆載體、工程菌或轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系，其特征在于，其包含編碼如權(quán)利要求1或2所述融合蛋白的核酸。

4.權(quán)利要求1或2所述融合蛋白的制備方法，其特征在于，人工合成pFSHα、pFSHβ、pFSHα-L-Fc和pFSHβ-L-Fc的編碼基因，并進(jìn)行密碼子優(yōu)化，優(yōu)化后的基因分別克隆到真核表達(dá)載體中；將pFSHα重組載體和pFSHβ-L-Fc重組載體同時(shí)轉(zhuǎn)化真核細(xì)胞，并在真核細(xì)胞中表達(dá)，分離純化目標(biāo)蛋白；或?qū)FSHβ重組載體和pFSHα-L-Fc重組載體同時(shí)轉(zhuǎn)化真核細(xì)胞，并在真核細(xì)胞中表達(dá)，分離純化目標(biāo)蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述真核表達(dá)載體為pcDNA3.1，所述真核細(xì)胞選自293、CHO細(xì)胞。

6.權(quán)利要求1或2所述融合蛋白在制備用于促進(jìn)動(dòng)物繁殖或治療動(dòng)物生殖相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用；其中，所述動(dòng)物選自豬、牛、羊。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述促進(jìn)動(dòng)物繁殖為同期發(fā)情或超數(shù)排卵。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述動(dòng)物為豬。