[發(fā)明專利]一種可用于牛血清白蛋白硝基化損傷檢測分析的電化學(xué)傳感器及其制備方法

在審

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• 申請日: 2017-09-14
• 公開（公告）號: CN107655956A
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李原婷;楊小霞;常興;藺華林;韓生
• 申請（專利權(quán)）人: 上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司31253
• 代理人: 楊軍

1.一種可用于牛血清白蛋白硝基化損傷檢測分析的電化學(xué)傳感器，包括工作電極、參比電極和輔助電極構(gòu)成的三電極體系，其特征在于：所述工作電極為玻碳基底表面電沉積有納米金/石墨烯/氯化高鐵血紅素復(fù)合材料修飾的玻碳電極。

2.一種如權(quán)利要求1所述的可用于牛血清白蛋白硝基化損傷檢測分析的電化學(xué)傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)納米金/氧化石墨烯/氯化高鐵血紅素復(fù)合電沉積液的制備：

a.首先配制HAuCl₄儲備液：將HAuCl₄溶解于去離子水中，震蕩搖勻，并于2-8℃保存，使用前稀釋；

b.再配制氧化石墨烯GO溶液：取Hummer法制備的氧化石墨烯GO與去離子水混合，超聲30min；

c.配制氯化高鐵血紅素hemin溶液：稱取氯化高鐵血紅素hemin與無水乙醇混合，加入氨水超聲30min溶解，并于2-8℃保存；

d.將上述配制的HAuCl₄溶液、GO溶液和hemin溶液按5:1-2:5的比例混合，得到電沉積液；

2)納米金/石墨烯/氯化高鐵血紅素復(fù)合材料修飾電極的制備：

a.玻碳電極的預(yù)處理：先用Al₂O₃拋光粉對電極進(jìn)行打磨，經(jīng)水沖洗后，再用電流-時間曲線技術(shù)對玻碳電極在0.1M pH7.0的磷酸鹽緩沖液PBS進(jìn)行活化，活化電位2.0V，活化時間200s；

b.納米金/石墨烯/氯化高鐵血紅素復(fù)合材料的一步電沉積：利用循環(huán)伏安技術(shù)，將玻碳電極在步驟1)所得的電沉積液中進(jìn)行原位沉積，掃描電位范圍為-1.5-0.6V，掃速為0.025V/s，掃描圈數(shù)為20圈，即制備得到納米金/石墨烯/氯化高鐵血紅素復(fù)合材料修飾的玻碳電極。

3.如權(quán)利要求2所述的制備方法制備的電化學(xué)傳感器應(yīng)用于牛血清白蛋白的硝基化損傷檢測分析。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，檢測條件為：

測定介質(zhì)：0.1M pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液

測定溫度：37℃

測定方法：差分脈沖伏安法

掃描電位范圍：0.1-0.6V。

5.采用權(quán)利要求2所述的制備方法制備的電化學(xué)傳感器對牛血清白蛋白硝基化損傷檢測的方法，包括如下步驟：

1)首先配制牛血清白蛋白溶液：稱取牛血清白蛋白與pH7.4的PBS混合均勻作為儲備液，并于4℃保存，使用前稀釋到10^-3μg/mL，然后在4℃條件下，將納米金/石墨烯/氯化高鐵血紅素復(fù)合材料修飾電極浸泡在10^-3μg/mL的BSA溶液中6小時，用去離子水沖洗備用，得到電化學(xué)生物傳感器；

2)在37℃恒溫條件下，將步驟1)所得的電化學(xué)生物傳感器置于pH7.4的PBS中，孵化5分鐘，在hemin作用下催化BSA的硝基化，采集差分脈沖伏安曲線，掃描電位范圍為0.1-0.6V；

3)在PBS中加入不同比例NaNO₂和H₂O₂溶液，37℃恒溫條件下孵化5分鐘，分別采集差分脈沖伏安曲線，掃描電位范圍為0.1-0.6V，即實(shí)現(xiàn)對牛血清白蛋白硝基化的檢測。