[發明專利]一種從大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的方法

在審

• 申請號: 201710817893.2
• 申請日: 2017-09-12
• 公開（公告）號: CN107418953A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 高世斌;任志勇;丁鑫;劉丹;吳玲;蘇順宗;聶治;羅博文;馬鵬;陳圳;馮幸;劉堅;唐祈林;瞿華興;王怡凱;沈亞歐
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司11246
• 代理人: 夏艷

技術領域

本發明屬于基因工程領域，具體地說，涉及一種從大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的方法。

背景技術

玉米作為飼料、糧食、工業原料等多用途的第一大農作物，對我國工業的發展和人民的生活發揮著巨大的推動作用。而大芻草作為玉米的祖先，其很多基因在玉米馴化過程中都受到了人工選擇，例如，大芻草是分蘗能力很強的植物，但玉米不具有分蘗能力，將與大芻草分蘗有關的tb1基因轉入玉米中，導致玉米的分蘗徒增。說明在馴化過程中，大芻草里的基因嚴重受到了人工選擇。當然也有一些基因不受人工選擇，在長期的馴化過程中保留了下來。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種從大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的方法。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的引物組，包括以下五個引物對，具體為：

1-F:5'-TGCCTGAATAAAGATAAGTATG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

1-R:5'-AGCAGTACAGTATCCAACAAG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

2-1F:5'-ATCGCCGGGAGCATCTCAAAC-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

2-1R:5'-TGCAGGTCCAGACCAGCAACG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

2-2F:5'-TGCTGCTTGACTAGCTTTCTGA-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；

2-2R:5'-TTCCTTCCTTTCCCTTCCCTC-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

3-1F:5'-TGGAGCGATTTGTGGACCTGG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；

3-1R:5'-AGCTCACGGACTTGGCGGTTT-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；

3-2F:5'-AGGGAAGGGAAAGGAAGGAAG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；

3-2R:5'-ATCACATCTCGCACAGGCATC-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

本發明還公開了一種從大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的方法，包括以下步驟：在大芻草里提取待測玉米磷信號響應基因總DNA，分別利用上述5個引物對進行PCR擴增反應，分別進行克隆測序，最后拼接序列，得到玉米磷信號響應基因全基因組序列。

進一步地，所述引物對1、2-1、2-2、3-1、3-2的退火溫度分別為52.00℃、63.30℃、60.00℃、63.90℃和60.20℃。

進一步地，所述PCR擴增反應的程序為：95℃預變性3min；95℃變性15s，退火溫度下退火15s，72℃延伸45min，循環35次；72℃終延伸5min；所述退火溫度對應為5個引物對各自對應的退火溫度。

進一步地，所述PCR擴增反應的體系為：Phanta Max Buffer 12.5μL、基因組DNA 2.0μL、dNTP Mix 0.5μL、上游引物1.0μL、下游引物1.0μL、1U/μL Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase0.5μL、ddH₂O7.5μL。

本發明還公開了一種上述的引物組在玉米磷信號響應基因或基因組擴增方面的應用。

本發明還公開了一種上述的方法在玉米磷信號響應基因或基因組擴增方面的應用。

與現有技術相比，本發明可以獲得包括以下技術效果：

1)本發明首次利用PCR擴增技術在大芻草里擴增出玉米磷信號響應基因的基因序列。

2)本發明的引物對擴增出來的目的帶亮且單一，證明本發明的引物對的特異性好。

當然，實施本發明的任一產品并不一定需要同時達到以上所述的所有技術效果。

附圖說明

此處所說明的附圖用來提供對本發明的進一步理解，構成本發明的一部分，本發明的示意性實施例及其說明用于解釋本發明，并不構成對本發明的不當限定。在附圖中：

圖1是本發明的第一段PCR擴增電泳圖；其中，1代表目的帶，2代表不同大小DNA的Marker；

圖2是本發明的第二段PCR擴增電泳圖；其中，1代表第二段第一小段的目的帶，2代表不同大小DNA的Marker，3代表第二段第二小段的目的帶；