[發明專利]一種從大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的方法

在審

• 申請號: 201710817893.2
• 申請日: 2017-09-12
• 公開（公告）號: CN107418953A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 高世斌;任志勇;丁鑫;劉丹;吳玲;蘇順宗;聶治;羅博文;馬鵬;陳圳;馮幸;劉堅;唐祈林;瞿華興;王怡凱;沈亞歐
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司11246
• 代理人: 夏艷

1.一種大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的引物組，其特征在于，包括以下五個引物對，具體為：

1-F:5'-TGCCTGAATAAAGATAAGTATG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

1-R:5'-AGCAGTACAGTATCCAACAAG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

2-1F:5'-ATCGCCGGGAGCATCTCAAAC-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

2-1R:5'-TGCAGGTCCAGACCAGCAACG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

2-2F:5'-TGCTGCTTGACTAGCTTTCTGA-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；

2-2R:5'-TTCCTTCCTTTCCCTTCCCTC-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

3-1F:5'-TGGAGCGATTTGTGGACCTGG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；

3-1R:5'-AGCTCACGGACTTGGCGGTTT-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；

3-2F:5'-AGGGAAGGGAAAGGAAGGAAG-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；

3-2R:5'-ATCACATCTCGCACAGGCATC-3'；其核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

2.一種從大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的方法，其特征在于，包括以下步驟：在大芻草里提取待測玉米磷信號響應基因總DNA，分別利用權利要求1所述5個引物對進行PCR擴增反應，分別進行克隆測序，最后拼接序列，得到玉米磷信號響應基因全基因組序列。

3.根據權利要求2所述的從大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的方法，其特征在于，所述引物對1、2-1、2-2、3-1、3-2的退火溫度分別為52.00℃、63.30℃、60.00℃、63.90℃和60.20℃。

4.根據權利要求3所述的從大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的方法，其特征在于，所述PCR擴增反應的程序為：95℃預變性3min；95℃變性15s，退火溫度下退火15s，72℃延伸45min，循環35次；72℃終延伸5min；所述退火溫度對應為5個引物對各自對應的退火溫度。

5.根據權利要求3所述的從大芻草里擴增玉米磷信號響應基因的方法，其特征在于，所述PCR擴增反應的體系為：Phanta Max B uffer 12.5μL、基因組DNA 2.0μL、dNTP Mix 0.5μL、上游引物1.0μL、下游引物1.0μL、1U/μL Phanta Max Super-Fidelity DNA Pol ymerase0.5μL、ddH₂O7.5μL。

6.權利要求1所述引物組在玉米磷信號響應基因或基因組擴增方面的應用。

7.權利要求2-5中任一權利要求所述方法在玉米磷信號響應基因或基因組擴增方面的應用。