[發(fā)明專利]一種獼猴桃多酚含量測(cè)定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710817829.4
• 申請(qǐng)日: 2017-09-12
• 公開（公告）號(hào): CN107621456A
• 公開（公告）日: 2018-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王艷蘋;李娜;朱金苗;董華澤;王子苓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 合肥師范學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N21/33
• 分類號(hào): G01N21/33
• 代理公司: 成都正華專利代理事務(wù)所(普通合伙)51229
• 代理人: 李林合,李蕊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種測(cè)定方法，具體涉及一種獼猴桃多酚測(cè)定方法。

背景技術(shù)

獼猴桃在我國(guó)廣泛種植，獼猴桃中含有多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如維生素C、多酚等，長(zhǎng)期食用獼猴對(duì)人的身體健康具有巨大幫助。

多酚擁有抗氧化效果，適當(dāng)攝取可以預(yù)防疾病，增強(qiáng)身體抗御能力。但過量攝取會(huì)引起肝臟和腸道不適，嚴(yán)重的更會(huì)造成肝臟損傷。因此應(yīng)該嚴(yán)格控制攝入量，人每次的安全口服劑量不超過0.25g。找到一種方法準(zhǔn)確測(cè)出獼猴桃中的多酚含量,即可知道每次食用多少獼猴桃比較合適。現(xiàn)有技術(shù)中有較多的獼猴桃多酚含量測(cè)定方法，但測(cè)定時(shí)采用一步浸提，不能將獼猴桃汁中搜有多酚提取出來，測(cè)得的含量差別較大，不夠準(zhǔn)確。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明要解決獼猴桃多酚含量測(cè)定不夠準(zhǔn)確的技術(shù)問題。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：提供一種獼猴桃多酚含量測(cè)定方法，具體步驟為：

(1)浸提：取一定量榨好的獼猴桃汁和體積分?jǐn)?shù)為50％的醇溶液放于20mL容量瓶中，在61～64℃條件下浸提45min；

(2)測(cè)定吸光度數(shù)值：浸提完成后，取10mL浸提液，在5000r/min的條件下離心15min；離心完成后，取上層清液，在特征吸收波長(zhǎng)715nm處測(cè)其吸光度數(shù)值；

(3)重復(fù)浸提：取離心后的上清液，重復(fù)步驟(1)、(2)5次；

(4)計(jì)算多酚當(dāng)量：將5次測(cè)得的吸光度數(shù)值帶入預(yù)先擬合出的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y＝2.8758x+0.4960中，計(jì)算出沒食子酸當(dāng)量值，即多酚含量；所述標(biāo)準(zhǔn)曲線中y代表多酚質(zhì)量濃度，x代表吸光度數(shù)值；

(5)計(jì)算多酚含量：多酚含量的計(jì)算公式為：W＝C×V/M；其中，W為多酚的含量，C為沒食子酸當(dāng)量，即依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出的多酚含量，V為浸提液的體積，M為取液量；將5次測(cè)得的多酚含量相加即得總多酚含量。

本發(fā)明的有益效果是：用醇溶液進(jìn)行浸提，對(duì)人員和環(huán)境友好，不會(huì)造成人員受傷和環(huán)境污染的問題。浸提溫度和時(shí)間適中，多酚類物質(zhì)不會(huì)分解或氧化，保證了多酚含量測(cè)定的準(zhǔn)確度。浸提完成后，浸提液在離心機(jī)的作用下離心15min，浸提液中的多酚類物質(zhì)和雜質(zhì)充分分離后進(jìn)入上層清液，測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確。特征吸收波長(zhǎng)提前由沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)出，在測(cè)定多酚含量時(shí)將上清液放入紫外分光光度計(jì)后，直接在715nm處測(cè)量吸光度即可，方便省時(shí)。測(cè)出吸光度數(shù)值后，帶入預(yù)先擬合好的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，經(jīng)過計(jì)算即可得出多酚的質(zhì)量濃度，方便快捷。多次重復(fù)對(duì)上層清液中的多酚進(jìn)行浸提，可以最大限度的將上層清液中的多酚提取干凈，將每次浸提得到的多酚含量進(jìn)行相加后，可以得到更為準(zhǔn)確的獼猴桃多酚含量。

在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。

進(jìn)一步，步驟(2)中特征吸收波長(zhǎng)的確定方法為：取1mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、1mL福林酚試劑和14mL水放入20mL容量瓶?jī)?nèi)，均勻混合后在1～5min內(nèi)加入3mL 20wt％的碳酸鈉溶液，混合均勻后定容；在25℃條件下放置1h，用紫外分光光度計(jì)在200～800nm之間進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，測(cè)定最大吸收時(shí)的波長(zhǎng)；測(cè)出的特征吸收波長(zhǎng)為715nm。

采用上述進(jìn)一步技術(shù)方案的有益效果是：提前確定出沒食子酸的特征吸收波長(zhǎng)，在測(cè)定獼猴桃多酚含量時(shí)可直接使用，節(jié)約大量時(shí)間。配置好溶液后放置在25～30℃條件下，獼猴桃成熟期內(nèi)的室溫正好處于該范圍，即將配置好的溶液放置在室內(nèi)即可，不用額外的升溫或降溫處理，操作簡(jiǎn)單，節(jié)約能源。在確定特征吸收波長(zhǎng)時(shí)，在200～800nm范圍內(nèi)全波長(zhǎng)掃描，掃描波長(zhǎng)范圍覆蓋了紫外光和可見光范圍，能夠準(zhǔn)確確定沒食子酸的特征吸收波長(zhǎng)。

進(jìn)一步，步驟(3)中標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的具體步驟為：

(1)配制梯度濃度溶液：將100mg沒食子酸放到20mL容量瓶中，用2mL乙醇溶解后定容至20mL；移取上述溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、1mL和2mL到20mL容量瓶中，加水定容至20mL，得一系列梯度濃度溶液；各取上述梯度濃度溶液0.2mL、福林酚試劑1mL和14mL水放入20mL容量瓶中，均勻混合后在1～5min內(nèi)加入3mL 20wt％的碳酸鈉溶液，混合均勻后定容；在25℃條件下放置1h；