[發(fā)明專利]用于降解煙葉中纖維素的XC-19-1菌株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710817213.7
• 申請(qǐng)日: 2017-09-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107488613B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊宗燦;劉向真;馮穎杰;許衡;李家美;楊永鋒;彭玉富;張耀廣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A24B15/20;C12R1/125
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時(shí)立新

本發(fā)明屬于煙草微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株用于降解煙葉中纖維素的枯草芽孢桿菌XC?19?1菌株及其在煙葉發(fā)酵中的應(yīng)用。該菌株為枯草芽孢桿菌XC?19?1，現(xiàn)保藏于武漢中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO：M 2017351。本發(fā)明通過(guò)特定菌株的篩選，設(shè)計(jì)了較為簡(jiǎn)便的菌劑處理煙葉的技術(shù)方案，使得本發(fā)明具有：工藝流程較為簡(jiǎn)便，煙葉處理成本較低，且處理周期較短，可明顯降低煙葉中的纖維素含量等技術(shù)優(yōu)點(diǎn)，因而在卷煙制造技術(shù)領(lǐng)域具有較好地推廣應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于煙草微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株用于降解煙葉中纖維素的枯草芽孢桿菌XC-19-1菌株及其在煙葉發(fā)酵方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

纖維素是煙葉的主要結(jié)構(gòu)成分，與半纖維素、木質(zhì)素等物質(zhì)共同組成了煙草細(xì)胞壁，決定著煙葉完整性，其含量與煙草品質(zhì)息息相關(guān)。纖維素對(duì)煙葉燃燒性有正向作用，可使煙葉持火力增加；但纖維素含量過(guò)高對(duì)煙葉品質(zhì)有負(fù)面影響：首先，易造成煙葉組織破碎，影響加工可塑性；其次，會(huì)影響煙葉吸食品質(zhì)，導(dǎo)致刺激性大，雜氣重，香氣掩蓋等；再次，大量的纖維素在超過(guò)600℃的溫度下會(huì)熱裂解生成稠環(huán)芳烴（PAH），影響煙葉吸食安全性。因此，探索安全有效的技術(shù)方法降解煙草纖維素，使其轉(zhuǎn)化為水溶性還原糖等對(duì)煙草品質(zhì)有利的小分子物質(zhì)，從而有效地提高煙葉質(zhì)量及安全性，已成為科技工作者普遍關(guān)注的問(wèn)題。

微生物發(fā)酵技術(shù)具有效率高、操作簡(jiǎn)單、條件溫和以及成本低廉等特點(diǎn)，因此篩選特異性微生物對(duì)煙葉進(jìn)行發(fā)酵，從而改善煙葉品質(zhì)一直是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供了一株能夠高效降解煙葉中纖維素物質(zhì)的枯草芽孢桿菌XC-19-1菌株，從而能夠有效促進(jìn)煙葉中大分子纖維素的降解，提高煙葉整體品質(zhì)。

本申請(qǐng)所采取的詳細(xì)技術(shù)方案如下。

一株用于降解煙葉中纖維素的XC-19-1菌株，該菌株屬于枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），最初是由2015年河南許昌B2F煙葉中分離而來(lái)，其保藏名稱為：枯草芽孢桿菌XC-19-1，分類學(xué)名稱為Bacillus subtilis XC-19-1，已于2017年6月19日保藏于武漢中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），保藏編號(hào)為CCTCC NO：M 2017351。

利用所述用于降解煙葉中纖維素的XC-19-1菌株所制備的菌劑，通過(guò)如下步驟制備而成：

（1）活化菌種，將XC-19-1菌株置于初篩固體培養(yǎng)基上，37℃條件下活化培養(yǎng)48 h~72 h；

（2）制備種子液，挑取步驟（1）中所培養(yǎng)的菌落，接種于液體種子培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)；

（3）擴(kuò)大培養(yǎng)，將步驟（2）中種子液轉(zhuǎn)接液體復(fù)篩培養(yǎng)基，培養(yǎng)至OD₆₀₀=1.8~2.0；

（4）制備菌劑，將步驟（3）中發(fā)酵液離心，棄上清，然后加入無(wú)菌水進(jìn)行懸浮，調(diào)整活菌數(shù)為（9~10）×10⁷個(gè)/mL。

制備過(guò)程中，培養(yǎng)基組分單位以g/L計(jì)，

所述初篩固體培養(yǎng)基組成為：羧甲基纖維素鈉 10.0，蛋白胨10.0，酵母粉5.0，KH₂PO₄ 1.0 ，MgSO₄?7H₂O 0.2，C₆H₁₄O₆ 2.0，NaCl 10.0，瓊脂20.0；pH=7.0左右；