[發明專利]一種阿侖膦酸鈉的高靈敏寬檢測范圍熒光檢測新方法

在審

• 申請號: 201710816613.6
• 申請日: 2017-09-12
• 公開（公告）號: CN107655871A
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 張普;賈春燕;尚京川
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責任公司50209
• 代理人: 高彬

1.一種阿侖膦酸鈉的熒光檢測新方法，其特征在于：先利用銅離子對寡聚核苷酸-熒光銀納米簇中銀納米簇熒光的猝滅作用，降低背景信號，然后樣品中阿侖膦酸鈉與銅離子結合形成復合物，使得銅離子遠離寡聚核苷酸-銀納米簇，銀納米簇熒光得以恢復，根據其熒光恢復程度與阿侖膦酸鈉濃度所做標準曲線計算樣品中阿侖膦酸鈉的含量。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：將Cu²⁺、DNA-AgNCs、含阿侖膦酸鈉的樣品在PB緩沖液中反應，反應結束后在熒光分光光度計上掃描200?800 nm范圍內的熒光激發和發射光譜，同時做空白試驗；根據最大激發波長下，最大發射波長處的熒光強度變化與阿侖膦酸鈉濃度所做的標準曲線，即可算出樣品中阿侖膦酸鈉的含量。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于： DNA-AgNCs、Cu²⁺、含阿侖膦酸鈉的標準品在PB緩沖液中反應；所述Cu²⁺的濃度為25?1200 nmol/L；所述PB緩沖液的pH為5.8?8.0。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于：所述Cu²⁺的濃度為500?1200 nmol/L；所述PB緩沖液的pH為7.0?8.0。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，采用如下步驟：先將含阿侖膦酸鈉的標準品加入到濃度為800 nmol/L 的Cu²⁺和pH 7.4 的PB緩沖液的混合溶液中混勻，室溫下靜置15 min；然后再加入DNA-AgNCs混勻，室溫下靜置20 min；之后在熒光分光光度計上設置最大激發波長為590 nm，掃描605?750 nm的熒光發射光譜，以最大發射波長640 nm處的熒光強度進行定量，同時做空白試驗；所述樣品中阿侖膦酸鈉的含量按下式計算：

Y=0.02382X+1.086

式中：

Y為相對熒光強度F / F₀；X為標準品中阿侖膦酸鈉的濃度，單位為μmol/L。

6.一種阿侖膦酸鈉的熒光檢測方法，包括空白試驗、樣品檢測及計算結果步驟：其特征在于：

（1）空白試驗：

空白組1：在1.5 mL離心管中依次加入40μL 濃度為800 nmol/L 的Cu²⁺、40μL pH 7.4的PB緩沖液與40μL 濃度為310 nmol/L 的DNA-AgNCs，加水補充至400 μL，渦旋混勻，室溫下靜置20 min；在熒光分光光度計上設置最大激發波長為590 nm，掃描605?750 nm的熒光發射光譜，以最大發射波長640 nm處的熒光強度進行定量，測定的熒光強度作為F₀；

（2）樣品測定：

在1.5 mL離心管中依次加入40μL 濃度為800 nmol/L 的Cu²⁺、40μL pH 7.4的PB緩沖液與40 μL含阿侖膦酸鈉的樣品溶液渦旋混勻，靜置15 min，再加入40μL 濃度為310 nmol/L的 DNA-AgNCs，加水補充至400 μL，渦旋混勻，室溫下靜置20 min；在熒光分光光度計上設置最大激發波長為590 nm，掃描605-750 nm的熒光發射光譜，以最大發射波長640 nm處的熒光強度進行定量，測定的熒光強度F；

（3）計算結果

所述樣品中阿侖膦酸鈉的含量按下式計算：

Y=0.02382X+1.086

式中：

Y為相對熒光強度F / F₀；X為樣品中阿侖膦酸鈉的濃度，單位為μmol/L。

7.如權利要求2?6任一項所述的方法，其特征在于，所述DNA-AgNCs的合成方法采用以下步驟：將DNA溶液中加入AgNO₃溶液，在PB緩沖液中渦旋混勻，避光孵育，再加入與AgNO₃等摩爾濃度的NaBH₄溶液反應制得。