[發(fā)明專利]一種利用氣相色譜?質(zhì)譜分析方法同時(shí)檢測(cè)酮糖和氨基糖的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710813087.8
• 申請(qǐng)日: 2017-09-11
• 公開（公告）號(hào): CN107655988A
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏永剛;梁軍;王天龍;孫慧敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 夏永剛
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司11139
• 代理人: 孫皓晨,馬鑫

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)酮糖和氨基糖的方法，特別涉及一種利用氣相色譜-質(zhì)譜分析方法同時(shí)檢測(cè)酮糖和氨基糖的方法。本發(fā)明屬于化學(xué)分析及檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

GC-MS(Gas Chromatograph-Mass Spectrometer)，為氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。GC-MS利用氣相色譜作為質(zhì)譜的進(jìn)樣系統(tǒng)，使復(fù)雜的化學(xué)組會(huì)得到分離；利用質(zhì)譜儀作為檢測(cè)器進(jìn)行定性和定量的分析。供試品經(jīng)GC分離為單一組分，按其不同的保留時(shí)間，與載氣同時(shí)流出色譜柱，經(jīng)過分子分離器接口，除去載氣，保留組分進(jìn)入MS儀離子源被離子化，樣品組分轉(zhuǎn)變?yōu)殡x子，經(jīng)分析檢測(cè)，記錄為MS圖。GC-MS中氣相色譜儀相當(dāng)于質(zhì)譜儀進(jìn)樣系統(tǒng)，而質(zhì)譜儀則是氣相色譜的檢測(cè)器，通過接口將二者有機(jī)地結(jié)合。GC-MS法現(xiàn)已廣泛用于藥物濫用監(jiān)測(cè)、興奮劑檢測(cè)、臨床疾病診斷、藥動(dòng)學(xué)研究等體內(nèi)藥物分析。

雖然現(xiàn)有技術(shù)中公開了GC-MS檢測(cè)法通過乙硫醇-三氟乙酸和六甲基二硅胺烷-三甲基硅烷體系對(duì)單糖和糖醛酸進(jìn)行衍生。但是，目前該方法沒有應(yīng)用到氨基糖和酮糖。

本發(fā)明首次采用乙硫醇-三氟乙酸和六甲基二硅胺烷-三甲基硅烷體系對(duì)酮糖和氨基糖進(jìn)行衍生，GC-MS檢測(cè)，并通過單因素考察實(shí)驗(yàn)對(duì)衍生試劑條件進(jìn)行了優(yōu)化。并將該方法應(yīng)用于中藥中游離酮糖和氨基糖的檢測(cè)，為中藥的進(jìn)一步深入研究奠定理論基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種通過利用氣相色譜-質(zhì)譜分析方法(GC-MS檢測(cè)法)同時(shí)檢測(cè)糖酮糖和氨基糖的方法。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段：

本發(fā)明的一種利用氣相色譜-質(zhì)譜分析方法同時(shí)檢測(cè)酮糖和氨基糖的方法，該方法通過乙硫醇-三氟乙酸和六甲基二硅胺烷-三甲基硅烷體系對(duì)樣品以及混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的單糖進(jìn)行硫醇化以及硅醚化衍生，制備得到酮糖和氨基糖的乙硫醇-硅醚化衍生產(chǎn)物，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)二氯甲烷或三氯甲烷萃取后，有機(jī)層通過氣相色譜-質(zhì)譜分析方法(GC-MS)進(jìn)行檢測(cè)，以不同濃度的混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液的峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為縱坐標(biāo)，以每種單糖的濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，用內(nèi)標(biāo)法定量樣品溶液中的酮糖和氨基糖及其他單糖的含量，所述的混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液中至少包括一種酮糖及一種氨基糖。

衍生后的反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)二氯甲烷或三氯甲烷溶液萃取，有機(jī)層含有可被GC-MS檢測(cè)的酮糖和氨基糖的乙硫醇-硅醚化衍生產(chǎn)物，因此可以檢測(cè)現(xiàn)有方法無法檢測(cè)的氨基糖。

其中，優(yōu)選的，所述的氣相色譜-質(zhì)譜的色譜條件為：采用Agilent 7890A-5975C氣質(zhì)聯(lián)用儀，采用DB-5毛細(xì)管柱，程序升溫，柱溫80℃，以2.5℃/min至190℃，以2℃/min至252℃，以250℃/min至300℃，氦氣作載氣，進(jìn)樣口溫度250℃，柱流速1.2mL/min，EI(70eV)，接口溫度250℃，離子源溫度230℃，掃描范圍:m/z50-550，掃描率:2.5scan/s。

其中，優(yōu)選的，通過乙硫醇-三氟乙酸和六甲基二硅胺烷-三甲基硅烷體系對(duì)酮糖和氨基糖進(jìn)行硫醇化以及硅醚化衍生的具體操作步驟為：量取相同體積的樣品溶液以及混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別濃縮至干，加入乙硫醇和三氟乙酸的混合溶液，20-25℃密封進(jìn)行硫醇化反應(yīng)10-50min，通風(fēng)櫥內(nèi)自然揮干；加入吡啶溶解，再加入六甲基二硅胺烷以及三甲基氯硅烷，50-90℃水浴，進(jìn)行硅醚化反應(yīng)10-50min，反應(yīng)后，加入二氯甲烷或三氯甲烷的水溶液，振蕩，離心，取下層有機(jī)層溶液，可直接進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜分析。

其中，優(yōu)選的，硫醇化反應(yīng)的時(shí)間為10min。

其中，優(yōu)選的，乙硫醇和三氟乙酸的體積比為2:1。

其中，優(yōu)選的，六甲基二硅胺烷與三甲基氯硅烷的體積比為3:1。

其中，優(yōu)選的，加入六甲基二硅胺烷和三甲基氯硅烷后，70℃水浴，進(jìn)行硅醚化反應(yīng)30min。

其中，優(yōu)選的，所述的內(nèi)標(biāo)為赤蘚醇。

其中，優(yōu)選的，所述的混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液中還包含中性糖及/或糖醛酸；所述的其他單糖包括中性糖及/或糖醛酸。

相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果是：

(1)本發(fā)明改進(jìn)了現(xiàn)有的衍生方法，并對(duì)衍生條件進(jìn)行了單因素的優(yōu)化，樣品經(jīng)過乙硫醇-三氟乙酸和六甲基二硅胺烷-三甲基硅烷體系對(duì)酮糖和氨基糖進(jìn)行衍生，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)二氯甲烷或三氯甲烷萃取，有機(jī)層含有可被GC-MS檢測(cè)的酮糖和氨基糖的乙硫醇-硅醚化衍生產(chǎn)物，因此可檢測(cè)出現(xiàn)有方法無法測(cè)定的氨基糖，而酮糖和氨基糖的檢測(cè)，一直缺乏專屬性的方法。