[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用氣相色譜?質(zhì)譜分析方法同時(shí)檢測(cè)酮糖和氨基糖的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710813087.8
• 申請(qǐng)日: 2017-09-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107655988A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏永剛;梁軍;王天龍;孫慧敏
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 夏永剛
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司11139
• 代理人: 孫皓晨,馬鑫

1.利用氣相色譜-質(zhì)譜分析方法同時(shí)檢測(cè)酮糖和氨基糖的方法，其特征在于，該方法通過(guò)乙硫醇-三氟乙酸和六甲基二硅胺烷-三甲基硅烷體系對(duì)樣品以及混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的單糖進(jìn)行硫醇化以及硅醚化衍生，制備得到酮糖和氨基糖的乙硫醇-硅醚化衍生產(chǎn)物，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)二氯甲烷或三氯甲烷萃取后，有機(jī)層通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜分析方法(GC-MS)進(jìn)行檢測(cè)，以不同濃度的混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液的峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為縱坐標(biāo)，以每種單糖的濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，用內(nèi)標(biāo)法定量樣品溶液中的酮糖和氨基糖及其他單糖的含量，所述的混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液中至少包括一種酮糖及一種氨基糖。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的氣相色譜-質(zhì)譜的色譜條件為：采用Agilent 7890A-5975C氣質(zhì)聯(lián)用儀，采用DB-5毛細(xì)管柱，程序升溫，柱溫80℃，以2.5℃/min至190℃，以2℃/min至252℃，以250℃/min至300℃，氦氣作載氣，進(jìn)樣口溫度250℃，柱流速1.2mL/min，EI(70eV)，接口溫度250℃，離子源溫度230℃，掃描范圍:m/z50-550，掃描率:2.5scan/s。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過(guò)乙硫醇-三氟乙酸和六甲基二硅胺烷-三甲基硅烷體系對(duì)酮糖和氨基糖進(jìn)行硫醇化以及硅醚化衍生的具體操作步驟為：量取相同體積的樣品溶液以及混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別濃縮至干，加入乙硫醇和三氟乙酸的混合溶液，20-25℃密封進(jìn)行硫醇化反應(yīng)10-50min，通風(fēng)櫥內(nèi)自然揮干；加入吡啶溶解，再加入六甲基二硅胺烷以及三甲基氯硅烷，50-90℃水浴，進(jìn)行硅醚化反應(yīng)10-50min，反應(yīng)后，加入二氯甲烷或三氯甲烷的水溶液，振蕩，離心，取下層有機(jī)層溶液，可直接進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜分析。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，衍生后的反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)二氯甲烷或三氯甲烷溶液萃取，有機(jī)層含有可被GC-MS檢測(cè)的酮糖和氨基糖的乙硫醇-硅醚化衍生產(chǎn)物，因此可以檢測(cè)現(xiàn)有方法無(wú)法檢測(cè)的氨基糖。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，硫醇化反應(yīng)的時(shí)間為10min。

6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，乙硫醇和三氟乙酸的體積比為2:1。

7.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，六甲基二硅胺烷與三甲基氯硅烷的體積比為3:1。

8.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，加入六甲基二硅胺烷和三甲基氯硅烷后，70℃水浴，進(jìn)行硅醚化反應(yīng)30min。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的內(nèi)標(biāo)為赤蘚醇。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液中還包含中性糖及/或糖醛酸；所述的其他單糖包括中性糖及/或糖醛酸。