[發明專利]一種糖肽或糖蛋白富集材料及其制備和應用

在審

• 申請號: 201710810842.7
• 申請日: 2017-09-11
• 公開（公告）號: CN109482150A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 張麗華;邵文亞;梁玉;楊開廣;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: B01J20/22
• 分類號: B01J20/22;B01J20/26;B01J20/28;B01J20/30;C07K1/14
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種糖肽或糖蛋白富集材料，是一種基于酰肼策略的糖鏈可釋放糖基化肽段/蛋白富集材料，其特征在于：

所述糖肽/糖蛋白富集材料，首先以硅膠顆粒或者聚合物顆粒為基質，第一步在顆粒表面修飾上巰基，然后通過巰基與二硫鍵的交換反應制備得到表面富含酰肼基團的富集材料；在基質微球與酰肼基團中間有二硫鍵相連。

2.按照權利要求1所述的富集材料，其特征在于：所述基質微球顆粒為硅膠顆粒，或者表面帶有環氧或者醛基的聚合物顆粒。

3.按照權利要求1所述的富集材料，其特征在于：所述基質微球顆粒為核-殼或全多孔結構的硅膠顆粒或者聚合物顆粒，其微球粒徑在500nm～20μm之間。

4.一種權利要求1-3任一所述富集材料的制備方法，其特征在于：

a)顆粒表面修飾巰基的過程：

1)對于硅膠顆粒，將活化后的硅膠顆粒分散在甲苯中，超聲，加入帶有硫醇基團的硅烷化試劑，攪拌回流6-30h；之后依次使用甲苯、甲醇和丙酮抽濾洗滌，重復抽濾洗滌2～5遍，在真空干燥箱中至恒重；

或者，2)對于表面帶有醛基的聚合物顆粒，分散于5-100mM,pH 5-9的磷酸鹽緩沖液中，加入1-10mg/mL的氰基硼氫化鈉，加入帶有巰基或者二硫鍵基團的氨基試劑，20-60℃震蕩反應5-30h；之后依次使用水，Tris-HCl重復洗滌2～5遍，在真空干燥箱中至恒重；

或者，3)對于表面帶有環氧的聚合物顆粒，分散在100-2000mM的NaOH溶液中，加入帶有巰基或者二硫鍵基團的氨基試劑，在30-60℃震蕩反應5-30h；之后依次使用水，Tris-HCl重復洗滌2～5遍，在真空干燥箱中至恒重；

如若上述2)或3)中加入的是帶有巰基基團的氨基試劑，不用繼續處理，直接待用；如若加入的是帶有二硫鍵基團的氨基試劑，微球干燥后重新分散在pH 5.0-9.0的緩沖溶液中，加入還原試劑，在30-60℃震蕩反應0.5-3h,斷裂二硫鍵生成巰基微球，之后使用水洗滌2～5遍，在真空干燥箱中至恒重；

b)酰肼微球的制備：將得到的巰基微球顆粒分散于pH 5.0-9.0的緩沖溶液中，加入帶有二硫鍵的酰肼化合物，在20-60℃下反應4-48小時；依次使用反應溶劑、水、10-100mM醋酸鈉洗滌微球，重復洗滌2～5遍，在真空干燥箱中至恒重即得糖鏈可釋放的糖基化肽段/蛋白富集材料。

5.按照權利要求4所述的制備方法，其特征在于：步驟a所用的硅烷化試劑具有如下結構：

其中X代表甲氧基或者乙氧基，m的值為1-4；

其中硅膠顆粒與硅烷化試劑的加入量質量比為1:0.05至1:1。

6.按照權利要求4所述的制備方法，其特征在于：

表面帶有醛基的聚合物顆粒和表面帶有環氧的聚合物顆粒為聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯聚合物顆粒中的一種或二種以上；

帶有巰基基團的氨基試劑為半胱胺，半胱氨酸，氨基苯硫酚以及其它同時含有氨基-NH₂和巰基-SH的化合物中的一種或二種以上；

帶有二硫鍵基團的氨基試劑為胱胺，胱氨酸以及其它同時含有氨基-NH2和二硫鍵-S-S-的化合物中的一種或二種以上；

步驟a所用的聚合物顆粒與氨基試劑的加入量質量比為1:0.01至1:0.2。

7.按照權利要求4所述的制備方法，其特征在于：步驟a和c所使用的還原劑為二硫蘇糖醇、三(2-羧乙基)膦中的一種或兩種，加入的量為10-1000M，步驟c中所用碘乙酰胺的量為還原劑摩爾濃度的1.0-3.0倍。

8.按照權利要求4所述的制備方法，其特征在于：

帶有二硫鍵的酰肼化合物為包含有如下結構的化合物：

其中m的值為1-3；

步驟b所用的酰肼化合物加入量與微球加入質量比為1:0.1-1:10。