[發明專利]在透射電鏡下觀察捕食螨生殖系統的方法

在審

• 申請號: 201710808936.0
• 申請日: 2017-09-09
• 公開（公告）號: CN108267468A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 王恩東;張桂娟;張正偉;周緒寶;胡學軍;王俊偉;李金萍;王俊俠;祝保英;龐博;安樹杰;陳海明;姜曉環;王伯明;呂佳樂;吳圣勇;楊靜逸;何永娟;李紅波
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所;首伯農（北京）生物技術有限公司
• 主分類號: G01N23/22
• 分類號: G01N23/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及在透射電鏡下觀察捕食螨生殖系統的方法，其特征是先獲取植綏螨科捕食螨生殖系統，再制備其透射樣本的方法，具體操作包括：先獲得交配中的捕食螨雌螨、雄螨，再通過乳酸浸泡、脫水、干燥處理，最后獲取捕食螨生殖系統；然后制備生殖系統透射樣本，先后操作順序包括固定、脫水、包埋、固化、切片、染色和觀察7個步驟。本發明利用十分簡易巧妙的方法首次獲得植綏螨科捕食螨生殖系統，并首次實現在透射電鏡下觀察生殖系統超微結構的目的，生殖系統的獲得能為透射電鏡下觀察其結構提供原材料，而透射電鏡的觀察結果又有利于生殖機理的研究。

技術領域

本發明涉及在透射電鏡下觀察捕食螨生殖系統的方法，屬于捕食螨生物學基礎研究領域。

背景技術

植綏螨科捕食螨生殖具有特殊性，雌螨若不交配則不會產卵，并且認為所有的后代均由受精卵發育而來；而雌螨是二倍體，雄螨為單倍體。這一結果被認為是植綏螨科捕食螨的特殊的生殖方式決定的，即假產雄孤雌生殖。然而，這一結論在論證時還有自相矛盾的地方，除此以外，無論是剛剛產下的卵還是剖腹卵，染色體均有單倍體存在。顯然，染色體若丟失或異質化，也一定是發生于卵產下前，甚至是卵細胞剛發育前后。因此，對植綏螨科捕食螨的受精卵發育過程進行研究是弄清其生殖機理的一個關鍵點，要研究受精卵的發育過程，就需要將其生殖系統（受精卵的發育結構）解剖出來進行研究。

通過對解剖出來的不同發育時期的植綏螨科捕食螨生殖系統進行透射電鏡觀察，可以從超微水平觀察捕食螨受精卵發育的過程，為明確雌螨在性別決定過程中起的作用提供參考。

但由于植綏螨科捕食螨的個體太小比較脆弱、體內被不透明的體液充滿、無法對其生殖系統進行準確定位、稍不小心就會導致蟲體破碎，現有資料又沒有相關如何解剖及如何觀察其生殖系統的報道，因此如何獲得和進行透射電鏡觀察植綏螨科捕食螨生殖系統，有待解決。

發明內容

本發明的目的是提供在透射電鏡下觀察捕食螨生殖系統的方法，應用本方法可以將植綏螨科捕食螨的生殖系統單獨分離出來，并在透射電鏡下進行超微觀察，這能為進一步明確植綏螨科捕食螨生殖系統提供參考。

本發明是先獲取植綏螨科捕食螨生殖系統，再制備其透射樣本的方法，具體操作步驟為：

（1）捕食螨生殖系統獲取：是先獲得交配中的捕食螨雌螨、雄螨，再通過乳酸浸泡、脫水、干燥處理，最后獲取捕食螨生殖系統，具體操作為：

1）交配中雌雄螨的獲取：在顯微鏡下，從捕食螨飼養種群內，挑出卵單獨飼養至成螨后進行雌雄螨配對，根據不同需要將處于交配過程中不同時間的雌雄個體連同飼養裝置一起放置于超低溫冰箱（-80℃）或液氮中，從而獲得不同交配時期的雌雄螨；

2）乳酸浸泡：取出交配中的捕食螨雌雄螨后，用細毛筆將雌雄螨放置到載玻片上，再用0號昆蟲針和細毛筆將雌雄個體分開，最后將雌雄螨分別挑入到盛有乳酸的指形管中，常溫放置3-4天；

3）脫水：從指形管中取出雌螨或雄螨或將兩者一起放入70％的酒精中，再進行梯度脫水，酒精的濃度依次為80％、90％、100％，具體是操作是先用膠頭滴管將上層酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循環直到100％的酒精；

4）干燥：將所取雌螨、雄螨樣品置于樣品臺上，利用真空干燥儀進行干燥2～3小時；

5）生殖系統獲取：經過干燥后的蟲體在體視顯微鏡下可以清楚地看到在所取捕食螨雌螨、雄螨樣品周圍部分呈透明色，只留下中間一塊橙色的部位即為捕食螨的生殖系統，最后在顯微鏡下用0號昆蟲針將螨體的背板輕輕揭掉，取出橙色部分即成功分離出的捕食螨生殖系統。

（2）生殖系統透射樣本的制備，先后操作順序包括固定、脫水、包埋、固化、切片、染色和觀察7個步驟，具體為：