[發明專利]一種特拉萬星的純化方法

有效

• 申請號: 201710806819.0
• 申請日: 2017-09-08
• 公開（公告）號: CN107629116B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 樂占線;黃楷;莊鴻;陳秀明;陳宏;江紅;連云陽;樂雨銀
• 申請（專利權）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/20;C07K1/16;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 呂元輝;林祥翔

本發明提供一種特拉萬星的純化方法，其包括如下步驟：1)將含有特拉萬星粗品混合物用甲醇?甲酸?水溶液按照重量比1：5至1：10混合溶解；2)將濾液經過洗脫液平衡好的層析介質純化；3)將上述層析液過納濾膜濃縮并補充pH4?5的鹽酸水溶液得鹽酸下濃縮液；4)將上述濃縮液加熱至40℃至60℃，與乙腈、甲醇、乙醇、丙酮中的一種溶劑B混合；5)再與乙醚或甲基叔丁基醚的溶劑C混合，攪拌降溫至4℃至10℃，過濾得鹽酸特拉萬星的固體。本案選用的層析介質萘基鍵合硅膠或芘基乙基鍵合硅膠，結合適當的酸溶液或者鹽溶劑體系對特拉萬星化合物在分離過程中與材料介質性能作用更緊密，能分離得到高純度的鹽酸特拉萬星。

技術領域

本發明涉及抗生素藥物領域，特別涉及一種特拉萬星的純化方法。

背景技術

特拉萬星是第一個半合成新型糖脂肽類抗生素,其獨特的作用機制和良好的臨床治療效果,市場前景非常廣闊。特拉萬星對MRSA、MRSE等活性均高于萬古霉素和替考拉寧,半衰期比萬古霉素長,臨床上可1日1次給藥。達己萬星半衰期長達174h,臨床上可一周給藥1次。奧利萬星具有十分突出的藥效學特性,其半衰期為393小時,可毎一療程給藥一次。

目前關于特拉萬星合成工藝研究主要集中在采用不同的方法合成疏水性側鏈N-(9-芴基甲氧簇基)-癸基氨基藝酸,然而與萬古霉素還原胺化反應、再通過Fmoc脫保護以及曼尼希反應得到特拉萬星。由于糖脂肽類抗生素活性位點多反應中副反應產物和目標產物特拉萬星是結構類似物，常規的生產技術工序如萃取、結晶等較難提高目標產物的純度達到藥用合格標準。

目前一些文獻報道的工藝制造出的特拉萬星具有純度不夠，或者生產工序復雜，操作時間長容易造成產品形成二聚物(Dimer)，且產品質量不穩定的缺陷。若形成穩定的晶體鹽可為后期的制劑提供良好的原藥。

發明內容

為了解決制備特拉萬星方法中的純度不夠的技術問題，本發明提供了一種特拉萬星的純化方法，具體地本發明是這樣實現的：

一種特拉萬星的純化方法，其包括如下步驟：

1)將含有特拉萬星粗品混合物用甲醇-甲酸-水溶液按照重量比1：5至1：10混合，使粗品混合物溶解，過濾除固體不溶物，得濾液；上述甲醇-甲酸-水溶液按照體積比2:1:1配置而成；

含有特拉萬星的反應混合物的工藝路線之一：

新型脂肽類抗生素鹽酸特拉萬星的合成方法：鹽酸萬古霉素(化合物Ⅰ)與N-(9-芴基甲氧羰基)-癸基氨基乙醛發生還原胺化反應，再脫9-芴甲氧羰基保護基、再與氨甲基膦酸進行曼尼希反應合成目標產物特拉萬星粗品。(下圖化合物Ⅲ)。

2)將濾液經過洗脫液平衡好的層析介質，上樣濾液與層析介質的重量比為1：50至1：100；層析介質為萘基鍵合硅膠、芘基乙基鍵合硅膠中的一種；洗脫液為3-5個柱體積的溶劑A-磷酸鹽緩沖溶液，磷酸鹽緩沖液為：磷酸二氫銨或磷酸氫二銨0.01mol/L-0.05mol/L，磷酸調節pH在2.0-2.5的緩沖溶液：溶劑A為乙腈、甲醇、乙醇、丙酮中的一種，采用梯度洗脫，洗脫液中溶劑A的質量分數從10％梯度變化到50％，洗脫流速為1BV/h至5BV/h；收集特拉萬星HPLC純度在95％以上的層析液；

選擇層析介質的原理：

特拉萬星是在萬古霉素4位環(如圖5)上糖胺基側鏈進行烷基化酰化上疏水性的癸氨乙基側鏈，并在7位氨基酸芳環的對位引入親水性的膦酸氨甲基，在藥理上疏水性基團有利于增加細胞膜的相互作用以及增加對腸球菌的抗菌活力，親水性基團則促進體內組織代謝和清除，減少腎毒性，改善了藥物在體內的藥代動力學性質。在合成分離純化角度，由于引入了新基團與原料萬古霉素空間排布結構上有較大的性質差異，在分離介質的選擇和純化路線的操作上也帶來了新問題；