[發明專利]一種特拉萬星的純化方法

有效

• 申請號: 201710806819.0
• 申請日: 2017-09-08
• 公開（公告）號: CN107629116B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 樂占線;黃楷;莊鴻;陳秀明;陳宏;江紅;連云陽;樂雨銀
• 申請（專利權）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/20;C07K1/16;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 呂元輝;林祥翔

1.一種特拉萬星的純化方法，其特征在于：其包括如下步驟：

1)將進行曼尼希反應合成的特拉萬星粗品或經過一次純化的純度到95％以上的樣品用甲醇-甲酸-水溶液按照重量比1：5至1：10混合，使所述進行曼尼希反應合成的特拉萬星粗品或經過一次純化的純度到95％以上的樣品溶解，過濾除固體不溶物，得濾液；上述甲醇-甲酸-水溶液按照體積比2:1:1配置而成；

2)將濾液經過洗脫液平衡好的層析介質，上樣濾液與層析介質的重量比為1：50至1：100；層析介質為萘基鍵合硅膠、芘基乙基鍵合硅膠中的一種；洗脫液為3-5個柱體積的溶劑A-磷酸鹽緩沖溶液，磷酸鹽緩沖液為：磷酸二氫銨或磷酸氫二銨0.01mol/L-0.05mol/L，磷酸調節pH在2.0-2.5的緩沖溶液；溶劑A為乙腈、甲醇、乙醇、丙酮中的一種，采用梯度洗脫，洗脫液中溶劑A的質量分數從10％梯度變化到50％，洗脫流速為1BV/h至5BV/h；收集特拉萬星HPLC純度在95％以上的層析液；

3)將上述層析液過納濾膜濃縮至原體積的1/10以上，上述過程中在濃縮至原體積的1/5時補充pH4-5的鹽酸水溶液，重復3至5次以去除緩沖鹽，再加入鹽酸調pH值至0.5-2，得濃縮液；

4)將上述濃縮液加熱至40℃至60℃，與其體積比為1：4至1：8的溶劑B混合，溶劑B為乙腈、甲醇、乙醇、丙酮中的一種，得混合液；

5)再與混合液體積比為1：0.3至1：1的溶劑C混合，溶劑C為乙醚、甲基叔丁基醚中的一種，攪拌降溫至4℃至10℃，過濾得鹽酸特拉萬星的固體。

2.根據權利要求1所述的特拉萬星的純化方法，其特征在于：步驟2)中當溶劑A為乙腈時，洗脫液中乙腈的質量分數梯度選擇為15％、18％、20％、50％；當溶劑A為甲醇時，洗脫液中甲醇的質量分數梯度選擇為20％、23％、25％、50％；當溶劑A為乙醇時，洗脫液中乙醇的質量分數梯度選擇為15％、18％、20％、50％；當溶劑A為丙酮時，洗脫液中丙酮的質量分數梯度選擇為15％、18％、20％、50％。

3.根據權利要求1所述的特拉萬星的純化方法，其特征在于：步驟3)中所述的納濾膜為聚醚砜耐有機溶劑的納濾膜，截留分子量為200-1000道爾頓。

4.根據權利要求1所述的特拉萬星的純化方法，其特征在于：步驟2)中的層析采用HPLC跟蹤層析液中的特拉萬星純度。

5.根據權利要求1所述的特拉萬星的純化方法，其特征在于：所述的步驟1)中特拉萬星的粗品混合物可以為鹽酸萬古霉素與N-(9-芴基甲氧羰基)-癸基氨基乙醛發生還原胺化反應，再脫9-芴甲氧羰基保護基、再與氨甲基膦酸進行曼尼希反應合成的特拉萬星粗品或經過一次純化的純度到95％以上的樣品。

6.根據權利要求1所述的特拉萬星的純化方法，其特征在于：其還包括步驟6)，將步驟5)中得到的鹽酸特拉萬星的固體用洗滌液洗滌，洗滌液為溶劑B、溶劑C與水按照體積比4：2：1制得的混合液，洗滌后過濾得終產物固體。