[發明專利]HPLC-MS測定小兒安神補腦顆粒中有效成分的方法

有效

• 申請號: 201710801824.2
• 申請日: 2017-09-07
• 公開（公告）號: CN107449846B
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 陳劍平;張尚斌;鄭平;胡兆流;高厚明
• 申請（專利權）人: 深圳市中醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務所 44275
• 代理人: 張明

1.一種HPLC-MS測定小兒安神補腦顆粒中有效成分的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)分別稱取甘草苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、甘草酸銨、柚皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黃芪甲苷對照品中的至少一種，以有機溶劑溶解定容，制得對照品溶液；

取供試品，溶解定容后過微孔濾膜，制得供試品溶液；

按小兒安神補腦顆粒的處方比例和制備工藝制得不含黃芪、枳殼、陳皮、遠志及甘草的陰性樣品，溶解定容后過微孔濾膜，制得陰性對照溶液；

(2)采用高效液相色譜法和質譜法檢測所述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，分別獲得對照品特征圖譜、供試品特征圖譜和陰性對照特征圖譜；

根據所述對照品特征圖譜、供試品特征圖譜和陰性對照特征圖譜，確定小兒安神補腦顆粒中的有效成分；

步驟(1)中，精密稱取甘草苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、甘草酸銨、柚皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黃芪甲苷對照品，制得的對照品溶液中，甘草苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、甘草酸銨、柚皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黃芪甲苷對照品的質量比為1:1:1:10:0.5:2:4:0.5，所述有機溶劑的體積與對照品的總質量的比值為1/100mL/μg；

步驟(2)具體為：取步驟(1)制備得到的對照品溶液，采用逐級稀釋法，用甲醇稀釋對照品溶液，制成質量濃度在0.0048-50μg/mL的系列不同濃度的對照品溶液，然后取系列不同濃度的對照品溶液按高效液相色譜法和質譜法進行測定分析，以系列對照品溶液的濃度作為橫坐標，以測得的相應標準品的峰面積作為縱坐標，獲得各對照品的線性回歸方程；取步驟(1)制備得到的供試品溶液，按高效液相色譜法和質譜法進行測定分析，并根據各對照品的線性回歸方程計算供試品溶液中各有效成分的含量；

所述高效液相色譜法按照下述色譜分析條件進行檢測：

色譜柱為Agilent TC-C18，尺寸為250mm×4.6mm×5μm；以濃度為10mmol/L的乙腈為流動相A液，乙酸銨為流動相B液，進行梯度洗脫；

梯度洗脫的具體條件為：當流動相A液濃度為15％時，梯度洗脫0-0.01min；當流動相A液濃度為15-19％時，梯度洗脫0.01-5min；當流動相A液濃度為19-35％時，梯度洗脫5-22min，流速為0.8mL/min；當流動相A液濃度為35-90％時，梯度洗脫22.1-35min，流速為1mL/min；當流動相A液濃度為90-95％時，梯度洗脫35.1-45min，流速為0.8mL/min，進樣量為10μL；

所述質譜法按照下述質譜檢測條件進行檢測：

采用電噴霧離子化源，檢測電壓3.5kV；霧化器壓力為241kPa；干燥氣為N₂，流速為1.5L/min；離子噴霧溫度為350℃；正負離子方式同時檢測，掃描方式為選擇離子監測；用于定量分析的監測離子為：甘草苷的[M-H]^-的質荷比為417m/z、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的[M+Cl]^-的質荷比為481.0m/z、柚皮苷的[M-H]^-的質荷比為579.53m/z、3,6'-二芥子酰基蔗糖酯的[M-H]^-的質荷比為753.25m/z、橙皮苷的[M-H]^-的質荷比609.15m/z、新橙皮苷的的[M-H]^-的質荷比為609.15m/z、黃芪甲苷的[M+Na]⁺的質荷比為807.4m/z；葛根素為內標，葛根素的[M-H]^-的質荷比為415.15m/z。

2.根據權利要求1所述的HPLC-MS測定小兒安神補腦顆粒中有效成分的方法，其特征在于，每1ml的有機溶劑中含有5μg甘草苷、5μg毛蕊異黃酮葡萄糖苷、5μg甘草酸銨、50μg柚皮苷、2.5μg 3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、10μg橙皮苷、20μg新橙皮苷和2.5μg黃芪甲苷對照品。