[發(fā)明專利]一種c-Myc蛋白可結(jié)合DNA片段及在c-Myc活性檢測中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710801572.3
• 申請日: 2017-09-07
• 公開（公告）號: CN107460192B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 童強松;鄭麗端;洪梅;王建群;肖文晶;葉霖;李聃;楊楓
• 申請（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/85;C12Q1/66
• 代理公司: 武漢泰山北斗專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42250
• 代理人: 程千慧

1.一種c-Myc蛋白可結(jié)合的DNA片段，其特征在于，包含多個c-Myc蛋白結(jié)合框，每個所述c-Myc蛋白結(jié)合框的序列獨立地為5'-SCACGTGS-3'，S表示C或G，每兩個相鄰的c-Myc蛋白結(jié)合框之間具有間隔序列，并且每兩個相鄰的c-Myc蛋白結(jié)合框之間的所述間隔序列為AT，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.權(quán)利要求1中所述的DNA片段在制備檢測細胞內(nèi)c-Myc轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性的藥物中的應(yīng)用。

3.一種用于檢測細胞內(nèi)c-Myc轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性的方法，其特征在于，該方法用于非診斷目的，包括以下步驟：

S1：將包括權(quán)利要求1中所述的DNA片段以及連接于所述DNA片段下游的報告基因表達框的報告基因系統(tǒng)導(dǎo)入所述細胞；

S2：通過檢測所述報告基因的表達來計算所述細胞內(nèi)c-Myc轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述報告基因系統(tǒng)為雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)，包括重組質(zhì)粒和對照質(zhì)粒，并且所述重組質(zhì)粒帶有所述DNA片段以及連接在所述DNA片段下游的熒光素酶I的表達框，所述對照質(zhì)粒帶有熒光素酶II的表達框，所示熒光素酶I與所述熒光素酶II不同。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述重組質(zhì)粒通過將所述DNA片段插入至質(zhì)粒pGL3-Basic的Kpn I與Hind III位點之間得到。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述對照質(zhì)粒為phRL-TK。

7.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一項所述的方法，其特征在于，S1具體包括：

S11：將所述細胞培養(yǎng)至貼壁，并恢復(fù)形態(tài)；

S12：將所述重組質(zhì)粒和對照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至細胞中。

8.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一項所述的方法，其特征在于，S2具體包括：

S21：轉(zhuǎn)染后將細胞繼續(xù)培養(yǎng)24-36小時，洗滌細胞；

S22：分別檢測轉(zhuǎn)染后的細胞中的熒光素酶I和熒光素酶II的活性；

S23：將熒光素酶II活性歸一化熒光素酶I活性得到值作為衡量c-Myc轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性的指標(biāo)。