[發明專利]檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒及其方法和用途

在審

• 申請號: 201710796480.0
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN109468368A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 陳忠;盧守建;潘紅超;趙琨;程樂華;黃士昂
• 申請（專利權）人: 上海新培晶醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 張新鑫;許亦琳

本發明提供一種檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒及其方法和用途，所述試劑盒至少包括：rrs基因檢測引物，所述rrs基因檢測引物至少有3種，其序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2以及SEQ ID NO.3所示。采用本發明所述的試劑盒能夠達到對結核分枝桿菌rrs基因的特異性擴增，有利于耐卡那霉素的結核分枝桿菌的快速鑒別，用以指導臨床用藥。

技術領域

本發明涉及一種檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒及其方法和用途。

背景技術

結核病(TB)是由結核桿菌感染引起的慢性傳染病。潛伏期4～8周。其中80％發生在肺部，其他部位(頸淋巴、腦膜、腹膜、腸、皮膚、骨骼)也可繼發感染。

結核病是威脅人類3大感染性疾病之一，是僅次于艾滋病的第2大致死性感染性疾病。據世界衛生組織發表的《2014全球結核病報告》中顯示，2013年全球有900萬人感染結核病，150萬人因結核病而死亡，其中包括36萬艾滋病毒感染者。除少數發病急促外，臨床上多呈慢性過程。導致結核病爆發流行的主要原因包括人口流動的加速、人類免疫缺陷病毒感染的流行、無規律化療和治療藥物的中斷及質量不佳導致耐藥菌株的出現。我國是22個結核病高負擔國家之一，雖然制定了一系列有關于TB防治的政策法規，但伴隨著耐藥結核分枝桿菌(MTB)的不斷傳播，TB的流行趨勢不容樂觀。

MTB耐藥突變株的自然變異率很低，但隨著耐藥菌株的傳播，原發性耐藥會逐漸增多，在許多TB控制較好的地區原發耐藥TB患者占全部耐藥患者的多數。耐藥結核的出現給TB的控制和治療帶來了很大困難，患者必須使用二線甚至三線藥物治療。

我國衛生部2008年調查結果顯示，我國TB患者中總耐藥率為38％，其中耐多要率為8.32％，對至少2種藥物產生耐藥(MDR)的結核病患者，必須要有結核菌藥敏試驗結果才能確診。世界衛生組織(WHO)推薦一線和二線抗結核藥物可以混合用于治療MDR-TB。卡那霉書做為治療結核病的一種二線藥物，引起其耐藥的主要因素是基因rrs的突變，MarionBlaschitz和Suzuki Y分別在文章中指出MTB耐卡那霉素主要是基因rrs(第1401和1402位堿基)突變所致；吳雪瓊在其文章中指出MTB耐卡那霉素是由于rrs突變所致，突變率為32.6％～67.4％。

現階段主要的幾種耐藥檢測方法：(1)PCR-限制性片段長度多態性(RFLP)：該方法的優點是簡便、快速、價廉，并具有較高的特異性，但只能用于分析已知序列特定位點的基因突變，應用范圍較局限。(2)基因芯片：其原理是采用固相原位合成或顯微打印技術，將寡核苷酸固化于支持物表面上，與帶標記的樣品進行雜交形成穩定的雙鏈結構，通過檢測目的單鏈上的熒光信號，對生物樣品進行快速、靈敏、高效地檢測，但操作技術有要求，相對成本也較高，對未知的突變不能檢測。(3)測序法：該方法能夠確定突變的部位與性質，是檢測基因突變的決定性方法，自動化DNA測序儀的應用使測序效率大大提高。該方法具有準確度高，特異性和重復性好等特點，可對基因型進行直觀的判斷，是分析基因突變的金標準，，但是突變率低于15％的檢測不出、實驗流程較復雜。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒及其檢測方法，該試劑盒可用于檢測rrs基因第1401和1402位堿基的基因型，準確度高，特異性好。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒，所述試劑盒包括rrs基因檢測引物，所述rrs基因檢測引物至少有3種，其序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2以及SEQ ID NO.3所示。

本發明的試劑盒采用PCR檢測技術進行rrs基因檢測，根據擴增及檢測情況可分析判斷檢測對象rrs基因第1401和1402位堿基的基因型。因此，引物的設計是本發明試劑盒的關鍵。