[發明專利]檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒及其方法和用途

在審

• 申請號: 201710796480.0
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN109468368A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 陳忠;盧守建;潘紅超;趙琨;程樂華;黃士昂
• 申請（專利權）人: 上海新培晶醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 張新鑫;許亦琳

1.一種檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒至少包括：rrs基因檢測引物，所述rrs基因檢測引物至少有3種，其序列分別如SEQ ID NO.1、SEQID NO.2以及SEQ ID NO.3所示。

2.根據權利要求1所述的檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中包含兩種獨立包裝的引物對，其中一個包裝含有的引物如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示，另外一個包裝含有的引物對如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示。

3.根據權利要求1所述的檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還含有無菌水、dNTP、PCR buffer、rTaq酶、樣品基因組DNA提取試劑中的一種或多種。

4.根據權利要求1所述的檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還含有陽性對照，所述陽性對照為含有rrs基因第1401和1402位堿基突變的結核分枝桿菌DNA樣本。

5.如權利要求1～4任意項所述的試劑盒的使用方法，至少包括以下步驟：

(1)提取樣品基因組DNA；

(2)將樣品基因組DNA加入裝有PCR反應體系的PCR管中，獲得樣品反應管，所述PCR反應體系中含有gyrA基因檢測引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

(3)第一輪PCR反應：反應管置于PCR儀上，設置循環參數，進行PCR反應，獲得第一輪PCR反應產物；

(4)取第一輪PCR反應產物作為第二輪PCR的模板，加入裝有PCR反應體系的PCR反應管中，同時加入引物，引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示；

(5)第二輪PCR反應：反應管置于PCR儀上，設置循環參數，進行PCR反應，獲得第二輪PCR反應產物；

(6)PCR反應結束后，分析結果。

6.根據權利要求5所述的使用方法，其特征在于：所述步驟(3)中的反應條件設置為(a)95.0℃5min；(b)95℃30s；58℃30s；72℃40s；步驟(b)循環35次；(c)72°10min。

7.根據權利要求1所述的使用方法，其特征在于，所述步驟(5)中的反應條件與步驟(3)相同。

8.如權利要求1～4任意項權利要求所述的檢測MTB耐卡那霉素相關基因rrs突變的試劑盒在制備rrs基因檢測產品中的用途。

9.根據權利要求8所述的用途，其特征在于，所述檢測產品用于檢測和篩選耐卡那霉素藥物的結核分枝桿菌。