[發明專利]真菌快速保存方法

有效

• 申請號: 201710796139.5
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN107674838B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 吳波明;郭芳芳;王寧;孫秋玉;陽威
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.真菌保存方法，其特征在于，采用改進的濾紙片法保存真菌，包括以下步驟：

1)將濾紙片用虛線刀劃間隔0.3cm-0.5cm的方格虛線，然后根據培養皿直徑大小，將濾紙片剪裁成與培養皿直徑大小相匹配的圓形、方形或多邊形，并在剪裁好的濾紙片中央開設直徑為0.3cm-0.5cm的圓孔或邊長為0.3cm-0.5cm的方形孔，完成濾紙片制作；高溫滅菌；

2)配制培養基，滅菌后將培養基分裝在培養皿中，待培養基凝固后，將上述制作好的濾紙片貼在培養基上，將菌絲塊放在培養基中央，密封后置于培養箱中培養；

3)菌絲長滿培養基后回收濾紙片，放入硫酸紙袋內，干燥后保存于-20℃冰箱；

所述真菌選自稻瘟菌(Pyricularia oryzae)、白絹病菌(Sclerotium rolfsii)、立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)、小麥紋枯病菌(Rhzoctonia solani)。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，整個操作在無菌條件下完成。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)具體為：菌絲長滿培養基后回收濾紙片，放入硫酸紙袋內，封口，置于超凈工作臺干燥，然后放在干燥器中室溫干燥；干燥后取出硫酸紙袋，放入信封內，為了長期保存，在信封內放適量干燥劑，信封裝入塑料密封袋中，置于-20℃保存，并定期更換干燥劑。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將濾紙片用虛線刀劃間隔0.3cm×0.3cm的方格虛線，然后將濾紙片剪裁成4cm×4cm的虛線大紙片，并在紙片中央開設直徑為0.5cm×0.5cm的方形孔，完成濾紙片制作；高溫滅菌；

S2、配制燕麥西紅柿瓊脂培養基，滅菌后將培養基分裝在培養皿中，待培養基凝固后，將上述制作好的紙片貼在直徑6cm的培養基上，將菌絲塊放在培養基中央，密封后置于25℃培養箱中培養；

S3、菌絲長滿培養基后回收紙片，放入8cm×12cm硫酸紙袋內，封口，置于超凈工作臺干燥2h，然后放在干燥器中室溫干燥7d；干燥后取出硫酸紙袋，放入信封內，為了長期保存，在信封內放適量干燥劑，信封裝入塑料密封袋中，置于-20℃保存，并定期更換干燥劑。