[發明專利]一種微生物檢測方法

在審

• 申請號: 201710795218.4
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN108950060A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 梅婷;曾令文
• 申請（專利權）人: 武漢中科志康生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/04
• 代理公司: 武漢今天智匯專利代理事務所(普通合伙) 42228
• 代理人: 鄧寅杰;嚴超

本發明公開了一種微生物檢測方法，包括以下步驟：構建抗體標記磁珠微球，將所需檢測的標靶微生物抗體與磁珠微球結合，形成復合體；制備特異識別靶標微生物，該微生物能與靶標微生物結合，形成帶有外源核酸的復合物，該外源引進的核酸序列與細菌基因組序列無相關；而后偶聯，形成微生物?抗體?磁珠復合體；通過上述復合體吸附標靶微生物的特定核酸序列，而后對其脫附、擴增、檢測，得到微生物檢測結果。本發明能夠快速、精確地完成各種細菌、病毒、病原體、細胞或蛋白等大分子微生物的檢測。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，特別是涉及一種微生物檢測方法。

背景技術

傳統的微生物檢測方法為培養法，國標沿用，雖然此種方法可靠準確，但由于要先增菌后血清學鑒定或者其他生化方法鑒定，往往需要三天時間甚至更長時間，在一些易變質的食品或者出關的食品上，并沒有那么長的時間來等待檢測，快速便捷檢測微生物方法的開發丞需解決。

發明內容

本發明所要解決的技術問題就是針對上述背景技術的不足，提供一種微生物檢測方法，在實現精確檢測的前提下，充分滿足簡單、快速、成本低廉的要求。

為解決上述技術問題，本發明提供的一種微生物檢測方法，包括以下步驟：

1)，構建抗體標記磁珠微球，將所需檢測的標靶微生物抗體與磁珠微球結合，形成復合體；

2)，配置特異微生物識別靶標，該微生物識別靶標能與靶標微生物結合，形成帶有外源核酸的復合物，將步驟1)產物與其偶聯，形成微生物-抗體-磁珠復合體；

3)，將標靶微生物與步驟2)所得的復合體混合，使標靶微生物的特定核酸序列與復合體吸附，吸附完成后分離出吸附特定核酸序列的復合體；

4)，采用磁性分離的方法，將步驟3)所得的復合體中特定核酸序列分離；

5)，擴增步驟4)所得的特定核酸序列，而后檢測，得到標靶微生物的檢測結果。

在上述技術方案中，所述靶標微生物可以是細菌、病毒、病原體、細胞或蛋白。

在上述技術方案中，所述步驟1)中，磁珠微球直徑為20-25nm。

在上述技術方案中，所述步驟1)中，抗體可以是一種或多種。

在上述技術方案中，所述步驟3)中，偶聯采用EDC和/或NHS方法進行偶聯。

在上述技術方案中，所述步驟4)中，分離出吸附特定核酸序列的復合體采用超濾管純化的方式。

在上述技術方案中，所述步驟6)中，采用PCR或SDA法進行擴增。

在上述技術方案中，所述步驟6)中，采用熒光定量PCR法或核酸膠體金檢測卡對擴增后的核酸序列檢測。

與現有技術相比，本發明的有益效果在于：本發明中抗體只能與活的微生物結合，擴增外源核酸序列，既避免了死菌造成的假陽性，又免去了提基因組的繁瑣步驟，和這過程中可能帶來的污染；同時，一個微生物上可以有多個抗體結合位點，也就是可以結合多個核酸，將信號放大，可以實現單個菌檢測；本發明富集微生物后一小時內能報告結果，大大縮短了檢測時長。

具體實施方式

以下對本發明的具體實施例作進一步的詳細描述：

本發明的微生物檢測方法，包括以下步驟：

1)，構建抗體標記磁珠微球，將所需檢測的標靶微生物抗體與磁珠微球結合，形成復合體；

2)，配置特異微生物識別靶標，該微生物識別靶標能與靶標微生物結合，形成帶有外源核酸的復合物，將步驟1)產物與其偶聯，形成微生物-抗體-磁珠復合體；