[發明專利]一種北美紅楓十月光輝品種組培快繁方法

有效

• 申請號: 201710793548.X
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN107333657B
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 劉玉民;閆洋洋;劉亞敏;李力;周文穎
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 武君

本發明公開了一種北美紅楓十月光輝組培快繁方法，本發明以莖段或葉片為外植體，經過（1）外植體消毒；（2）愈傷誘導培養；（3）愈傷增殖培養；（4）胚性細胞誘導；（5）不定芽誘導；（6）不定根誘導；（7）煉苗移栽等多步驟成功地獲得了該北美紅楓十月光輝品種組織培養再生植株，建立了北美紅楓十月光輝組織培養植株再生體系，為實現該品種規?；S育苗提供了參考。

技術領域

本發明涉及生物技術中植物組織培養領域，特別涉及一種北美紅楓十月光輝品種組培快繁方法。

背景技術

北美紅楓十月光輝是紅葉槭的一種，屬于大型落葉喬木。春季紅葉紅花，夏季葉片為綠色，秋季因溫度變化葉色呈現紅色，冬季落葉。原產于美國東部，十月光輝紅楓是中國引進的北美紅楓中表現最穩定、變色最紅艷的品種之一。

據報道播種、扦插可獲得幼苗，但播種成苗在經過性狀雜交后發生變異，其品種優良特性不易保留，而扦插苗出圃量低，也難達到市場需求。因而通過組培快繁獲得大量具母本優良特性苗木成為解決該問題有效方案。目前北美紅楓快繁體系尚在完善之中，僅有少數品種有所突破，其它品種研究多見于愈傷誘導階段，尤其是關于“十月光輝”不定器官形成的報道未見報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種北美紅楓十月光輝組培快繁方法。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種北美紅楓十月光輝品種組培快繁方法，包括以下步驟：

（1）外植體消毒：以北美紅楓十月光輝葉片或莖段為外植體，先對其進行消毒處理；

（2）愈傷誘導培養：將步驟（1）準備好的外植體接種到愈傷誘導培養基進行培養，將接種后的材料置于濕度75%，溫度（25±2）℃，光照14h、光照強度1500lx、黑暗10h條件的人工氣候箱中進行培養；

（3）愈傷增殖培養：將步驟（2）得到的愈傷組織每隔30d分割繼代于愈傷增殖培養基，在步驟（2）的相同培養條件下繼續培養；

（4）胚性細胞誘導：在上述愈傷基礎上選擇淺黃色、白色疏松愈傷組織接種于體胚誘導培養基培養15d，后將培養愈傷轉移到不含生長調節劑的培養基進行培養直到體胚細胞形成；

（5）不定芽誘導：將步驟（4）得到的胚性愈傷組織置于不定芽誘導培養基中培養，培養條件為濕度85%，溫度（25±2）℃，光照18h、光照強度3000lx、2h黑暗；

（6）不定根誘導：將步驟（5）得到的胚性愈傷組織繼代于不定根誘導培養基中培養，培養條件為濕度85%，溫度（25±2）℃，光照6h、光照強度1500lx、18h黑暗；

（7）煉苗移栽：將已長出完整器官的幼苗培養基瓶蓋打開，在光照強度3000lx的光照下煉苗5～7d，之后將組培苗從培養基中取出，洗掉根部培養基后栽至配置的營養土中進行培養15d，培養條件為濕度35%，溫度（25±2）℃，光照14h、光照強度2500lx、黑暗10h，幼苗表面噴施水，后連同營養土一起栽植大田。

進一步地，所述步驟（1）中外植體的消毒處理方法是：采集無任何部位損傷的葉片外植體，用流量為80mL/s的自來水清洗15～20min，之后將其移至超凈工作臺用75%醫用酒精消毒30s，后用無菌水清洗5次，再用0.1%的升汞溶液消毒2～4min，再用無菌水清洗5次，后用無菌濾紙吸去葉片表面水分，備用；

或者，采集所留葉柄不能太短的莖段外植體，將莖段剪成2～3cm長，用流量為120mL/s的自來水清洗15～20min，之后將其移至超凈工作臺用75%醫用酒精消毒30s，用含有效氯3%的次氯酸鈉消毒6～8min，后用無菌水清洗5次，再用0.1%的升汞溶液消毒8～10min，再用無菌水清洗5次，后用無菌濾紙吸去葉片表面水分，備用。