[發明專利]一種北美紅楓十月光輝品種組培快繁方法

有效

• 申請號: 201710793548.X
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN107333657B
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 劉玉民;閆洋洋;劉亞敏;李力;周文穎
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 武君

1.一種北美紅楓十月光輝品種組培快繁方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)外植體消毒：以北美紅楓十月光輝葉片或莖段為外植體，先對其進行消毒處理；

(2)愈傷誘導培養：將步驟(1)準備好的外植體接種到愈傷誘導培養基進行培養，將接種后的材料置于濕度75％，溫度(25±2)℃，光照14h、光照強度15001x、黑暗10h條件的人工氣候箱中進行培養，所述愈傷誘導培養基為MS+0.8～1.0mg/LTDZ+1.0～1.2mg/L6-BA+0.5～0.8mg/LNAA+35～40g/L蔗糖+7.5～10g/L瓊脂的半固定培養基；

(3)愈傷增殖培養：將步驟(2)得到的愈傷組織每隔30d分割繼代于愈傷增殖培養基，在步驟(2)的相同培養條件下繼續培養，所述愈傷增殖培養基為MS+2.0～2.5mg/LTDZ+0.8～1.0mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+35～40g/L蔗糖+7.5-10g/L瓊脂的半固定培養基；

(4)胚性細胞誘導：在上述愈傷基礎上選擇淺黃色、白色疏松愈傷組織接種于體胚誘導培養基培養15d，后將培養愈傷轉移到不含生長調節劑的培養基進行培養直到體胚細胞形成，所述體胚細胞誘導培養基為MS+1.6～2.0mg/LTDZ+0.4～0.5mg/LNAA+35～40g/L蔗糖+7.5～10g/L瓊脂的半固定培養基，所述的不含生長調節劑的培養基為MS+35～40g/L蔗糖+7.5～10g/L瓊脂的半固定培養基；

(5)不定芽誘導：將步驟(4)得到的胚性愈傷組織置于不定芽誘導培養基中培養，培養條件為濕度85％，溫度(25±2)℃，光照18h、光照強度30001x、2h黑暗，所述不定芽誘導培養基為MS+1.2～1.6mg/LTDZ+0～0.5mg/LNAA+35～40g/L蔗糖+7.5～10g/L瓊脂半固定培養基；

(6)不定根誘導：將步驟(5)得到的胚性愈傷組織繼代于不定根誘導培養基中培養，培養條件為濕度85％，溫度(25±2)℃，光照6h、光照強度15001x、18h黑暗，所述不定芽誘導培養基為MS+1.2～1.6mg/LTDZ+0～0.5mg/LNAA+35～40g/L蔗糖+7.5～10g/L瓊脂半固定培養基；

(7)煉苗移栽：將已長出完整器官的幼苗培養基瓶蓋打開，在光照強度30001x的光照下煉苗5～7d，之后將組培苗從培養基中取出，洗掉根部培養基后栽至配置的營養土中進行培養15d，培養條件為濕度35％，溫度(25±2)℃，光照14h、光照強度25001x、黑暗10h，幼苗表面噴施水，后連同營養土一起栽植大田，所述營養土的配方是腐殖質土、蛭石和石英砂，按體積比為3～4：1：1。

2.根據權利要求1所述的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(1)中外植體的消毒處理方法是：采集無任何部位損傷的葉片外植體，用流量為80mL/s的自來水清洗15～20min，之后將其移至超凈工作臺用75％醫用酒精消毒30s，后用無菌水清洗5次，再用0.1％的升汞溶液消毒2～4min，再用無菌水清洗5次，后用無菌濾紙吸去葉片表面水分，備用；

或者，采集所留葉柄不能太短的莖段外植體，將莖段剪成2～3cm長，用流量為120mL/s的自來水清洗15～20min，之后將其移至超凈工作臺用75％醫用酒精消毒30s，用含有效氯3％的次氯酸鈉消毒6～8min，后用無菌水清洗5次，再用0.1％的升汞溶液消毒8～10min，再用無菌水清洗5次，后用無菌濾紙吸去葉片表面水分，備用。